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Whynot9527

新虫 (初入文坛)

[交流] 发酵液未知物的分离 已有4人参与

一种细菌的发酵液中存在可以抗病毒的物质,现在要把它分离出来,我设计的大致方案是用石油醚,乙酸乙酯,氯仿分级萃取,得到三个有机相,最后剩下水相,然后分别去做抗病毒实验,不知道这样可不可以?如果某一有机相有抗病毒效果,接下来该怎么做?水相有效果又该怎么做?
求大神帮助!!!

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duanmuxi3377

铜虫 (著名写手)

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小冀-: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-04-19 09:30:18
我们一般是这样处理的:先过滤,滤掉菌丝体。然后把滤液浓缩一下(如果滤液量少可不浓缩),用乙酸乙酯萃取浓缩液,最后就有两部分了,乙酸乙酯相和水相,把这两部分还有发酵液原液分别测活,你就知道活性化合物在哪部分了。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2018-04-18 18:17:35
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Whynot9527

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
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2楼: Originally posted by duanmuxi3377 at 2018-04-18 18:17:35
我们一般是这样处理的:先过滤,滤掉菌丝体。然后把滤液浓缩一下(如果滤液量少可不浓缩),用乙酸乙酯萃取浓缩液,最后就有两部分了,乙酸乙酯相和水相,把这两部分还有发酵液原液分别测活,你就知道活性化合物在哪 ...

谢谢回复,我做的细菌,没有菌丝。其实我是想知道我的方案可不可行,如果萃取出来有效果,后续的实验大致该怎么进行?

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3楼2018-04-19 00:22:30
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duanmuxi3377

铜虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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3楼: Originally posted by Whynot9527 at 2018-04-19 00:22:30
谢谢回复,我做的细菌,没有菌丝。其实我是想知道我的方案可不可行,如果萃取出来有效果,后续的实验大致该怎么进行?
...

我一直在做链霉菌还真菌次级代谢产物的研究,没有坐过细菌,我们都是只用乙酸乙酯萃取,分成乙酸乙酯和水两部分,然后测活,再分离有活性的部分。从做真菌的角度讲,你萃取成这么多分不太可行而且效率会比较低,代谢产物里小极性的东西还是比较少的,用氯仿萃可能萃不出来什么东西,直接用乙酸乙酯萃取就够了。不知道你学的是什么专业,有没有做过药化的分离工作,后期具体分离我们主要是用MCI、大孔树脂,硅胶,ODS,高效液相等分离手段对有效成分分离。请问你打算发酵多少升?

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4楼2018-04-20 09:10:00
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Whynot9527

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by duanmuxi3377 at 2018-04-20 09:10:00
我一直在做链霉菌还真菌次级代谢产物的研究,没有坐过细菌,我们都是只用乙酸乙酯萃取,分成乙酸乙酯和水两部分,然后测活,再分离有活性的部分。从做真菌的角度讲,你萃取成这么多分不太可行而且效率会比较低,代 ...

谢谢你的回复。我是看了文献还有论坛上其他人建议才用的分级萃取,毕竟不知道活性物质的理化性质,还是想试着先做一下,按你说的,我觉得至少乙酸乙酯相会有活性吧。还有我发酵的量也就几十毫升,因为做活性实验每次也就几毫升发酵液的量,就是不知道萃取能不能把活性物质尽可能萃出来?

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5楼2018-04-21 15:32:44
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duanmuxi3377

铜虫 (著名写手)


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恩,可以试试的。你是想确定最终有活性的化合物还是想知道在哪个部位就可以呀?我们发酵单纯测活一般会发酵50毫升,如果想要分离得到活性化合物我们一般最少发酵三十升。

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6楼2018-04-21 20:34:13
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Whynot9527

新虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by duanmuxi3377 at 2018-04-21 20:34:13
恩,可以试试的。你是想确定最终有活性的化合物还是想知道在哪个部位就可以呀?我们发酵单纯测活一般会发酵50毫升,如果想要分离得到活性化合物我们一般最少发酵三十升。
...

再次感谢您的回复!
我最终目的只是要确定是什么物质,刚开始还是先确定所在部位。你发酵二三十升是得到纯的活性物质膏子吧,这个量太大,我暂时只是做定性实验,确定物质是什么就行。还有我想问一下,你们一般萃取时的有机溶剂和水比例是多少?萃了几次?

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7楼2018-04-21 21:07:53
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duanmuxi3377

铜虫 (著名写手)


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7楼: Originally posted by Whynot9527 at 2018-04-21 21:07:53
再次感谢您的回复!
我最终目的只是要确定是什么物质,刚开始还是先确定所在部位。你发酵二三十升是得到纯的活性物质膏子吧,这个量太大,我暂时只是做定性实验,确定物质是什么就行。还有我想问一下,你们一般萃取 ...

我们发酵30升,最后得到纯的单体化合物也就几毫克,三毫克才够打核磁的才能确定化合物的结构。萃取我一般是1:1,萃取三次。

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8楼2018-04-22 07:31:35
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Whynot9527

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by duanmuxi3377 at 2018-04-22 07:31:35
我们发酵30升,最后得到纯的单体化合物也就几毫克,三毫克才够打核磁的才能确定化合物的结构。萃取我一般是1:1,萃取三次。
...

嗯嗯,十分感谢。以后实验遇到问题希望还能够多多请教

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9楼2018-04-22 16:28:54
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耐苦鬼

新虫 (小有名气)


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2楼: Originally posted by duanmuxi3377 at 2018-04-18 18:17:35
我们一般是这样处理的:先过滤,滤掉菌丝体。然后把滤液浓缩一下(如果滤液量少可不浓缩),用乙酸乙酯萃取浓缩液,最后就有两部分了,乙酸乙酯相和水相,把这两部分还有发酵液原液分别测活,你就知道活性化合物在哪 ...

你好 我按这个方法做的 下一步我需要从乙酸乙酯相中得到我要的物质 下一步改该怎么办呢

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10楼2018-05-03 14:37:21
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