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Whynot9527新虫 (初入文坛)
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发酵液未知物的分离 已有4人参与
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一种细菌的发酵液中存在可以抗病毒的物质，现在要把它分离出来，我设计的大致方案是用石油醚，乙酸乙酯，氯仿分级萃取，得到三个有机相，最后剩下水相，然后分别去做抗病毒实验，不知道这样可不可以？如果某一有机相有抗病毒效果，接下来该怎么做？水相有效果又该怎么做？ 求大神帮助！！！ 发自小木虫Android客户端 |
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duanmuxi3377
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我们一般是这样处理的：先过滤，滤掉菌丝体。然后把滤液浓缩一下（如果滤液量少可不浓缩），用乙酸乙酯萃取浓缩液，最后就有两部分了，乙酸乙酯相和水相，把这两部分还有发酵液原液分别测活，你就知道活性化合物在哪部分了。 发自小木虫Android客户端 |
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Whynot95272楼2018-04-18 18:17:35
Whynot9527
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3楼2018-04-19 00:22:30
duanmuxi3377
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我一直在做链霉菌还真菌次级代谢产物的研究，没有坐过细菌，我们都是只用乙酸乙酯萃取，分成乙酸乙酯和水两部分，然后测活，再分离有活性的部分。从做真菌的角度讲，你萃取成这么多分不太可行而且效率会比较低，代谢产物里小极性的东西还是比较少的，用氯仿萃可能萃不出来什么东西，直接用乙酸乙酯萃取就够了。不知道你学的是什么专业，有没有做过药化的分离工作，后期具体分离我们主要是用MCI、大孔树脂，硅胶，ODS，高效液相等分离手段对有效成分分离。请问你打算发酵多少升？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-04-20 09:10:00
Whynot9527
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谢谢你的回复。我是看了文献还有论坛上其他人建议才用的分级萃取，毕竟不知道活性物质的理化性质，还是想试着先做一下，按你说的，我觉得至少乙酸乙酯相会有活性吧。还有我发酵的量也就几十毫升，因为做活性实验每次也就几毫升发酵液的量，就是不知道萃取能不能把活性物质尽可能萃出来？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-04-21 15:32:44
duanmuxi3377
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恩，可以试试的。你是想确定最终有活性的化合物还是想知道在哪个部位就可以呀？我们发酵单纯测活一般会发酵50毫升，如果想要分离得到活性化合物我们一般最少发酵三十升。 发自小木虫Android客户端 |
6楼2018-04-21 20:34:13
Whynot9527
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再次感谢您的回复！ 我最终目的只是要确定是什么物质，刚开始还是先确定所在部位。你发酵二三十升是得到纯的活性物质膏子吧，这个量太大，我暂时只是做定性实验，确定物质是什么就行。还有我想问一下，你们一般萃取时的有机溶剂和水比例是多少？萃了几次？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2018-04-21 21:07:53
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我们发酵30升，最后得到纯的单体化合物也就几毫克，三毫克才够打核磁的才能确定化合物的结构。萃取我一般是1：1，萃取三次。 发自小木虫Android客户端 |
8楼2018-04-22 07:31:35
Whynot9527
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