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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

[交流] 镍离子与咪唑环结合

镍离子能够与目的蛋白组氨酸中咪唑环结合,提高流动相中咪唑浓度,其会将目的蛋白替换洗脱。
但是与镍离子结合的高浓度咪唑怎么洗下来,用不含咪唑的流动相能洗下来么,如果洗下来,镍离子是什么状态,未和其他物质结合?如果没洗下来,下一针目的蛋白怎么会与镍离子结合。(浓度密度大的咪唑环会替换比其弱的咪唑,从而将目的蛋白洗脱)

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
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rwufrbb87

木虫 (著名写手)


感謝樓主
2楼2018-04-18 12:43:18
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rwufrbb87 at 2018-04-18 12:43:18
感謝樓主

????

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
3楼2018-04-18 19:22:00
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chen_xiao_xu

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
正常水冲洗就可以了,实在不行就用100毫摩尔的EDTA直接把镍干掉,然后重新挂镍

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4楼2018-04-21 10:56:31
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hc-material

专家顾问 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
额,和镍结合的咪唑用水洗不下来,下一次用时候HIS把其置换下来,竞争结合,然后洗脱是高浓度的咪唑置换蛋白,高浓度的咪唑和镍结合,并不是所有咪唑结合,只是环境中咪唑浓度高,然后亲和力比和蛋白结合时高,蛋白置换咪唑时,环境咪唑浓度低或者没有,蛋白此时和镍的亲和力高。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2018-04-23 10:56:55
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rwufrbb87

木虫 (著名写手)


感謝樓主
6楼2018-04-23 15:28:17
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2018-04-23 10:56:55
额,和镍结合的咪唑用水洗不下来,下一次用时候HIS把其置换下来,竞争结合,然后洗脱是高浓度的咪唑置换蛋白,高浓度的咪唑和镍结合,并不是所有咪唑结合,只是环境中咪唑浓度高,然后亲和力比和蛋白结合时高,蛋白 ...

哦哦,懂了,是和环境中咪唑浓度相关。
我一直限制自己思维,认为与咪唑环密度相关,只可能咪唑替换目标蛋白,而不会发生目标蛋白与与咪唑竞争镍离子。
谢谢!

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
7楼2018-04-24 07:43:25
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zxldbnydx

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by chen_xiao_xu at 2018-04-21 10:56:31
正常水冲洗就可以了,实在不行就用100毫摩尔的EDTA直接把镍干掉,然后重新挂镍

谢谢回复!
你说的没问题,不过我想问的是水洗之后咪唑是否还与镍离子结合,楼下大神回答了我的疑惑。

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只有拼出来的美丽,没有等出来的辉煌!
8楼2018-04-24 07:45:29
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yubeihong

铁杆木虫 (职业作家)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
好像也不对。如果按楼上的意思,组氨酸标签浓度低的时候就吸附不上,没法纯化,好像并非如此。

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9楼2018-05-18 22:26:18
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