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hu676674

新虫 (小有名气)
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求引物设计大神指导
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有个1100bp左右的基因序列，用premier5.0设计出来的product length 340,请问跑出来只有250，请问能不能设计一个全部都扩出来的引物，感谢各位大神！

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1楼 2018-04-17 19:56:41
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hu676674

新虫 (小有名气)
大神回复一下啊

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28楼2018-04-17 20:38:18
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hu676674

新虫 (小有名气)
大神何在

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29楼2018-04-17 20:38:27
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琴瑟在御108

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
扩增全长你需要做RACE啊

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39楼2018-04-17 21:10:45
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hu676674

新虫 (小有名气)
引用回帖:
39楼: Originally posted by 琴瑟在御108 at 2018-04-17 21:10:45
扩增全长你需要做RACE啊

怎么做啊？

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41楼2018-04-17 21:38:43
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
340有点短，要设计地长一些。
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42楼2018-04-17 23:10:56
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-04-18 07:57:01
你的这1100bp基因序列是否已经确定，库里可以找到序列。如果是，直接把引物放到基因两头，稍微调整一下就可以。如果不是需要做race。

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43楼2018-04-18 06:51:53
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hu676674

新虫 (小有名气)
引用回帖:
43楼: Originally posted by hanxiaominhu at 2018-04-18 06:51:53
你的这1100bp基因序列是否已经确定，库里可以找到序列。如果是，直接把引物放到基因两头，稍微调整一下就可以。如果不是需要做race。

库里有，但是用软件设计出来的长度只有340，扩不出长片段，是不是引物有问题？谢谢

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44楼2018-04-18 14:34:16
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你的目的是什么，如果是想把这1100bp全扩出来，就像刚才有人讲的，两端设计引物就好了，需要注意的是，GC含量和长度尽量一致，可以使退火温度一致，而且需要将其中1条引物反向互补过来。
如果你只是想扩增长一点的，重新设计引物就好了，可以直接挑选出一个想要的长度两端的序列做引物。
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45楼2018-04-18 15:18:39
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
44楼: Originally posted by hu676674 at 2018-04-18 14:34:16
库里有，但是用软件设计出来的长度只有340，扩不出长片段，是不是引物有问题？谢谢
...

库里有序列，就要看你扩增这段序列的目的是什么了。设计引物的时候应该可以设定产物大小吧！这个符合你目的就行哇。如果你是要扩增出来序列做融合表达，那你得注意扩增产物的两头是否符合载体要求。

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46楼2018-04-18 18:03:58
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XIAOmutong92楼
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jixiangbao3楼
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蓝蓝09214楼
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wangyan1235楼
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