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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » crispr基因编辑鉴定是否敲除
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 22:18:04
我都没有测序直接重叠PCRp出来直接电转的
...

没有测序怎么确定序列的变化呢

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11楼2018-04-15 22:22:08
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无金易主

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 22:22:08
没有测序怎么确定序列的变化呢
...

直接PCR验证只有同源臂的大小，中间的目的基因已经没有了

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12楼2018-04-15 22:47:27
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
好像我们做的差别很大

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13楼2018-04-15 22:56:15
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无金易主

新虫 (小有名气)
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11楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 22:22:08
没有测序怎么确定序列的变化呢
...

不需要测序的，你最近敲掉了吗

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14楼2018-04-15 22:56:58
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 22:56:58
不需要测序的，你最近敲掉了吗
...

我们做的方式不一样，我们没有涉及同源臂

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15楼2018-04-15 23:00:14
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 22:56:58
不需要测序的，你最近敲掉了吗
...

目前还没有发现敲掉的株系

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16楼2018-04-15 23:01:07
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无金易主

新虫 (小有名气)
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13楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 22:56:15
好像我们做的差别很大

我是先p出来目的基因两端同源臂，带有N20的PTargetF和PCas9都电转到宿主菌抗性筛选长出来的就是敲掉的验证就好，不知道你是咋做的

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17楼2018-04-15 23:02:25
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 23:02:25
我是先p出来目的基因两端同源臂，带有N20的PTargetF和PCas9都电转到宿主菌抗性筛选长出来的就是敲掉的验证就好，不知道你是咋做的
...

我们做的差别比较大，用的应该不是同一个载体，我们是以靶点为中心设计引物扩增，送测序

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18楼2018-04-15 23:07:03
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无金易主

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 唯念念念 at 2018-04-15 23:00:14
我们做的方式不一样，我们没有涉及同源臂
...

知道了我是敲除细菌的基因、你应该是敲除细胞

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19楼2018-04-15 23:08:45
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唯念念念

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 无金易主 at 2018-04-15 23:08:45
知道了我是敲除细菌的基因、你应该是敲除细胞
...

我做的是植物，

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20楼2018-04-15 23:09:42
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