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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于细菌蛋白表达！
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 关于细菌蛋白表达！

现在有2个DNA序列，其编码序列等完全一致，唯一不同的是a序列前面添加了来自酵母菌的信号肽（约200bp），b序列没加；
发现a、b转化大肠杆菌后，a转化菌长得比b转化菌慢。
请问各位，这是挑取的单克隆差异呢？还是加了信号肽的原因？应该从哪方面着手分析？是二级结构么？

刚听说增加了分泌信号会影响生长速度。请问是什么原理？而且，来自酵母的a-信号肽也能影响细菌生长么？

多谢解惑了。
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1楼 2009-03-18 22:04:46
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
序列编码一致但加上信号肽后序列就不一致了呀
不知道你转化的是什么样的e.coli是做克隆还是做表达,如果做克隆,我认为有这样两种原因,一种就是你挑取的克隆有区别,所以菌生长速度有区别,这个要你重复挑菌来验证一下你的结果是不是可以重复,另一种原因就是当有了信号肽后这个克隆有毒性.这方面的情况我见过,我转化过两种荧光克隆,GFP和RFP,至少我做过的T载体接入的, pGreen接入的,和PBI接入的,在DH5a和农杆菌LBA4404中RFP长的都比GFP慢很多,但二者的序列只有少数碱基的替换,从而表明RFP本身是有毒性的.
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2楼2009-03-18 23:14:56
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
好的，谢谢！受益匪浅。
我是用来做表达的。用的宿主菌是BL21（DE3）

[ Last edited by melodyxin on 2009-3-19 at 20:02 ]
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3楼2009-03-19 20:01:08
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