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疏水纯化 已有3人参与
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前几天做了重组GFP的纯化，用的自己装的疏水柱，装了5ml,填料用的Phenyl FF（载量大约50mg/ml）,查了一篇文献，目的是想重复他们的实验，做出一样的结果，文献用的1ml预装柱，我是自己装的柱子，但是文献的样品蛋白中含量未知，我的实验只准备了大概1mg（可能不到）蛋白量的样品，平衡洗脱条件与buffer都与文献中一样，但是，最后实验没有做出来，洗脱过程中几乎没有峰，有那么一个也是响应值很低很低，而且峰型很丑，那个峰附近收集到的液体检测到了荧光，但是也是很低。洗脱完用平衡液平衡柱子的过程中，出来了两个峰，比洗脱过程的那个小峰响应值高，但是收集到的液体没有检测到荧光。请教大神们 ，我的实验出了什么问题？洗脱之后平衡阶段出来的俩峰是我的样品峰吗？我的样品中蛋白量是不是太低了？ |
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