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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 7000多bp的片段用Q5酶和2x phanta Max Master Mix都扩增不出来
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Susie Yan

新虫 (初入文坛)

[求助] 7000多bp的片段用Q5酶和2x phanta Max Master Mix都扩增不出来 已有2人参与

片段太长了，实验室最常用的两种酶都做不出来。尝试过分成差不多大小的三段分开P，都扩增出来了，但是没法连接到一起。是不是要换更高效的酶？

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1楼 2018-04-08 13:42:38
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
7k的有点大，一般的酶不一定扩的出来。可以考虑分段克隆，县克隆一部分进去，然后继续向这个含有部分基因的载体里克隆下一部分。。或者交给我们帮你克隆~~~
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2楼2018-04-08 23:17:33
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
7K如果没有GC-rich等高难度的区段的话，也还好了。从质粒PCR，10k的都做过。推荐一个酶，primeSTAR GXL
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
3楼2018-04-09 02:16:13
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