| 查看: 1945 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
oldtimeyoung木虫 (知名作家)
|
[求助]
求教，如何将长基因片段（7200bp）连接平末端载体上？ 已有1人参与
|
|
| 本人最近正在尝试将一个长度为7200bp的基因片段连接到平末端载体上。使用的平末端试剂盒为全式金的p-EASY Blunt cloning kit 试剂盒。多次连接均未成功（调整连接时间，改变插入片段和载体的比例）。有时连接出现少量菌斑，提取质粒大小不一，且均不正确。当pcr验证这些质粒时，却可以扩增到插入目的基因的部分片段，提示连接时插入片段出现降解断裂，导致连接仅仅连接了该基因的一部分。但是我连接前跑了电泳进行过验证，结果显示插入的目的基因为一条均一清晰的条带，酶切插入片段也可以得到正确的酶切产物，因此理论上讲连接时加入的基因片段是完整正确的。所以应当是连接的过程中，插入的目的基因在和平末端载体连接时不知道因为什么原因发生了降解。使用该试剂盒之前最大连接过5000bp的基因，并未遇到任何困难。不知道有没有哪位虫友连接过大小相似的基因，还望赐教。 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有205人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
hongyingwu
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 148 (高中生)
- 金币: 17761
- 红花: 28
- 帖子: 29761
- 在线: 452.5小时
- 虫号: 4388826
- 注册: 2016-01-30
- 专业: 动物生理及行为学
3楼2018-04-06 15:13:25
hongyingwu
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 148 (高中生)
- 金币: 17761
- 红花: 28
- 帖子: 29761
- 在线: 452.5小时
- 虫号: 4388826
- 注册: 2016-01-30
- 专业: 动物生理及行为学
2楼2018-04-06 15:08:22
oldtimeyoung
木虫 (知名作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3756.1
- 散金: 4076
- 帖子: 5870
- 在线: 136.7小时
- 虫号: 2653029
- 注册: 2013-09-13
- 专业: 药物化学
4楼2018-04-06 16:47:18
oldtimeyoung
木虫 (知名作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3756.1
- 散金: 4076
- 帖子: 5870
- 在线: 136.7小时
- 虫号: 2653029
- 注册: 2013-09-13
- 专业: 药物化学
5楼2018-04-06 17:04:09
