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之前从野生型模板里面P一段大小为300bp的目的片段, 退火温度51℃。一开始用PS体系没有P出来,改用rTaq体系后成功P出来且挺亮。 过了一段时间后,用相同的体系重新再P,再也p不出原来的亮度,且双酶切过柱后浓度不到10ng/ul,无法用作酶连。 开始怀疑是模板污染,于是借用他人模板,情况时好时坏,有的亮有的淡,问了师姐后改变加样方式,用别人的模板p,依旧很淡。现在找不出原因,浓度一直不达标,不知道诸位对这种现象有什么看法或者见解 发自小木虫Android客户端 |
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