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混合研磨仪在苯酚-硫酸法测多糖中的前处理应用探讨 已有2人参与
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应用行业： 食品药品、农业、生物、医学、法医检验等 测定原理： 多糖在浓硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定 所需试剂： 1. 浓硫酸:分析纯，95.5% 2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配) 4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。 5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。 6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。 7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。 8. 6mol/L 盐酸 操作步骤： 1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，沸水浴显色15min以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 2.样品含量测定: ①取样品1克(湿样)，置于10ml PTFE密封离心管中，加入5mm、3mm氧化锆磨球，加15%TCA溶液（注意:总的溶液不要超出10毫升，不要超出离心管的容量)，将每个适配器上均装满6个编号的10ml带液PTFE离心管，TJ2011高通量混合研磨仪设定转速1400rpm，研磨时间3min（视物料软硬情况定，一般不超过5min） ②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右（TJ2011高通量混合研磨仪能量大，速度快，动植物组织会在3min之内全部打碎，不存在大残渣，直接离心即可，避免了二次转移产生污染） ③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。 ④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。 |
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