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求助如何提取酵母菌的DNA?
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| 拜托各位，有没有谁知道非常简单的酵母菌DNA提取方法，越便宜越好，如果知道请不吝赐教，并写明具体的操作方法，小虫不胜感激！ |
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yubeihong
铁杆木虫 (职业作家)
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2楼2009-03-17 13:10:07
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(1)菌种接种于50ml YEPD培养基中，培养至对数期。 (2)6000 rpm离心10min，弃上清，用无菌生理盐水洗涤菌体3次。 (3)取菌体用液氮冷冻，研磨成细小粉末，按1g菌体加4ml提取缓冲液，剧烈混匀，37℃保温1h，不时颠倒混匀。 (4)加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）到样品中，颠倒混匀（温和），4℃， 12000rpm 10min，将上清转入一新的离心管中，重复一次，加入等体积的氯仿/异戊醇（24:1），4℃，12000rpm离心10min。 (5)转移上清到一个新的离心管中，加入0.6倍体积的冷的异丙醇，轻轻混匀至DNA沉淀，-20℃放置1h以上。 (6) 12000rpm 10min，弃上清，用70%酒精洗涤沉淀2次4℃，10000rpm离心 10min，室温风干，重溶于1ml三蒸水中。 提取的基因组DNA用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测，用紫外分光光度计计测230nm的吸光度A230，260nm的吸光度A260和280nm的吸光度A280（卢圣栋 1999）。 |
3楼2009-03-19 08:33:09