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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNA问题 急
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x8q4h11

木虫 (小有名气)

[交流] RNA问题 急

我用Trizol法提取马铃薯叶片中的RNA，异丙醇沉淀时看到了明显的沉淀，测OD值（260，280）也比较合适，怎么跑电泳跑不出条带呢？而且胶面一半亮一半暗（染液分界线很明显）……请各位虫友帮帮忙，谢谢。

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-2 at 09:34 ]
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1楼 2009-03-17 09:48:13
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allen8368

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
amisking(金币+3,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-1 21:58
首先你的RNA浓度是多少 然后决定你跑电泳的量 我一般是上样0.5-1微克  
这样跑出来的条带会比较清楚
经常会遇到你说的那种胶的情况 具体原因不是很清楚  但我想跑RNA的时候一定要做一块质量比较好的胶  EB可以稍微多加一点 以增强显色效果
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慢慢的认识你，再慢慢的忘记你...........
2楼2009-03-17 10:38:48
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x8q4h11

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by allen8368 at 2009-3-17 10:38:
首先你的RNA浓度是多少 然后决定你跑电泳的量 我一般是上样0.5-1微克  
这样跑出来的条带会比较清楚
经常会遇到你说的那种胶的情况 具体原因不是很清楚  但我想跑RNA的时候一定要做一块质量比较好的胶  EB可以稍 ...

我上样也是0.5-1微克，请问你是如何制胶的？谢谢
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3楼2009-03-17 10:43:24
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allen8368

木虫 (正式写手)
1.5%的琼脂糖胶啊  只是有的时候我比较懒 会在胶刚刚加热完之后还很烫的时候就加EB  然后就跑掉了 呵呵
我觉得加热融解的时候要充分一点 不要太多小的琼脂糖颗粒没融
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慢慢的认识你，再慢慢的忘记你...........
4楼2009-03-17 11:47:06
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虫子739

铁虫 (小有名气)
是不是电泳时降解了？
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5楼2009-03-19 12:28:37
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wangtengxu

木虫 (正式写手)
分界线明显是因为电泳后你曝光时间太长

没有条带是因为a浓度低b电泳槽没处理，RNA降解（不过还是能看到的）
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想和有趣的人一起做有趣的事。
6楼2009-03-20 15:46:48
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wuchuqiu

铁虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 7-1 21:58
首先，你提取RNA 的操作正确，保证有RNA
然后，保证你点样点进去了，才能跑出来带
一般来说降解不会这么快，这么彻底的，除非你加了RNA酶
胶面一半亮一半暗是因为染料也在迁移，染料量要合适，电泳时间也要合适
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7楼2009-03-20 16:36:11
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kangkang997

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
EB在RNA电泳时会向胶孔方向跑的，所以最后拍照的结果是一半亮一半暗的，你可以将EB加在RNA样品里混匀跑，胶里面就不要加了
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8楼2009-07-01 19:56:12
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