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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求助原核蛋白表达问题
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松五学子

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助原核蛋白表达问题 已有1人参与

最近原核表达载体，使用的酶切位点是：XhoI和HindIII，载体是：PET-32a，序列测序都正确，利用LB培养基，诱导表达的蛋白是大小在25kDa和35kDa之间，而我的目的蛋白是40多kDa，请问这是什么问题引起的？恳请各位给予帮助指导，谢谢！

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1楼 2018-03-27 23:37:44
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有时候预测的不准（如果某种氨基酸含量高得话），另外你的marker是不是不太准
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2楼2018-03-28 04:51:54
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松五学子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2018-03-28 04:51:54
有时候预测的不准（如果某种氨基酸含量高得话），另外你的marker是不是不太准

谢谢您的回复，请问哪些氨基酸存在的时候，预测会不准呐？我实验室一直用这个marker，准确性没有问题。

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3楼2018-03-28 09:05:10
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Cuic_Qing

新虫 (初入文坛)
我也遇到了 差15kD  楼主解决了吗

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4楼2018-04-09 11:04:13
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匿名

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5楼2018-04-09 13:08:17
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匿名

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6楼2018-04-09 13:13:23
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松五学子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Cuic_Qing at 2018-04-09 11:04:13
我也遇到了 差15kD  楼主解决了吗

重新更换了酶切位点，还没有找到原因，求大神指教啊

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7楼2018-04-10 21:30:30
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松五学子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 深蓝浅蓝玲 at 2018-04-09 13:08:17
32a载体前面还有两个大标签，预测的时候算进去了吗？

32a空载大小大约是18kDa，我的目的片段720bp，这样计算下来，我表达的融合蛋白应该是四十多才对

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8楼2018-04-10 21:32:38
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Cuic_Qing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 松五学子 at 2018-04-10 21:32:38
32a空载大小大约是18kDa，我的目的片段720bp，这样计算下来，我表达的融合蛋白应该是四十多才对
...

不是算目的基因表达的蛋白吗 你怎么载体的也算上了

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9楼2018-04-11 13:46:39
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