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seapink107

木虫 (小有名气)

[交流] [求助]测荧光发射光谱

在测一种荧光物质 Alexa Fluor 594, 我用470nm的波激发,测到的峰非常小,再加上玻璃本身的背景,基本上看不到物质自身的峰。

现在的问题是,浓度基本上就是最大了,激发波长必须小于510,还有什么办法可以提高信号的强度。

这个问题困扰我好久了,麻烦各位了。



补充
本实验是将荧光物质连接在光纤表面进行测量,所有用于溶液中的办法都不适用。
现在正在努力提高表面物质含量,但根据测试,提高浓度效果并不是特别出众,其他方法仍然殷切期望中...


[ Last edited by seapink107 on 2009-3-17 at 01:09 ]
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dx109

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
seapink107(金币+3,VIP+0):最快回复的,谢谢了 3-17 01:02
这个物质本身的最大发射应该是确定的,你用最大发射反扫看看最大激发在什么地方;如果最大激发超过了510nm,那得到的就不是最大发射而是较弱的发射峰;如果一定要限定激发波长小于510nm,那么尝试一下加入一些可以提高峰强度的试剂看看,比如表面活性剂之类的
2楼2009-03-16 15:18:05
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ljy999..

银虫 (小有名气)



seapink107(金币+1,VIP+0):thanks 3-17 01:02
同2楼,只有在最大发射波长下找出的最大激发波长才是信号最强的,在试试吧
3楼2009-03-16 17:39:11
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sally208

专家顾问 (著名写手)

★ ★
seapink107(金币+2,VIP+0):第一个办法比较靠谱,但是我是册固体表面的物质,增大狭缝,干扰信号也变大了。还是谢谢你,呵呵 3-17 01:04
Solution 1: 尝试增大仪器的狭缝宽度
Solution 2: 选用光学质量好即透光度高的荧光比色皿进行实验
Solution 3: 尝试在其他合适的良溶剂中测试
Solution 4: 只能找一个激发器功率高的仪器了,呵呵

4楼2009-03-16 17:42:41
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syt7839

银虫 (小有名气)

★ ★
seapink107(金币+2,VIP+0):理由同前,thanks 3-17 01:04
1 确定物质的最大发射峰位置,找到对应的激发峰,离激发峰越近,发射峰会越强。
2 增大狭缝宽度原来是5nm现在变到10nm试试
3 加入表面活性剂
4 物质的浓度也不能太大,会导致自猝灭
5 换仪器
5楼2009-03-16 19:20:46
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xiongyansi

★ ★
seapink107(金币+2,VIP+0): 估计你说的那篇应该是FRET方面的吧,我也在做相关研究,thanks 3-17 19:37
上面各位都提出了自己的看法,这些都是很常规的方法,应该也是很有效的。我看过一篇文献,是有关金属增强的,记得也是利用Alexa Fluor 与金属胶粒作用,它的荧光发射会大大的增强。楼主可以看看这方面的文章。我记得The Analyst上面有一篇综述,08年的
6楼2009-03-17 13:18:12
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xiongyansi

想请问楼主在做什么方面?我也在做一些有关光纤表面包埋探针的研究,如果可以的话,我想你请教请教!
7楼2009-03-17 21:08:19
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bioconnor

金虫 (正式写手)

弱问,请问荧光增强的机理有哪些? 另外: 我发现有些物质不同浓度其紫外峰也不一样啊?
8楼2009-03-17 22:02:03
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opq691

荣誉版主 (知名作家)

小木虫酱油店店主

优秀版主

能否有条件实验一下低温荧光或固体基质上做?
▄︻┳═一*▄︻┳═一*众里寻虫千百度,蓦然回首,虫在酱油坛深处!▄︻┳═一*▄︻┳═一*
9楼2009-03-17 22:14:04
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seapink107

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiongyansi at 2009-3-17 22:08:
想请问楼主在做什么方面?我也在做一些有关光纤表面包埋探针的研究,如果可以的话,我想你请教请教!

你好,我是做在光纤表面进行FRET实验的
10楼2009-03-19 09:12:59
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