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zhumenjun

木虫 (正式写手)

[交流] 求助：关于淡水藻类CAT和SOD的测定

我使用的是淡水藻--普通小球藻，提取酶的方法是将培养5天后的小球藻液离心收集（4000rpm/min），倒去上清液，然后将藻倒入预冷的研钵中用液氮研磨，加入2ml磷酸缓冲液，再高速离心20min，使用上清液进行CAT和SOD的酶活测试，使用的南京建成的试剂盒，但效果不好，CAT和SOD的吸光度变化很小。
1.离心收集后小球藻后，里面仍还有一定的水分，然后再去研磨，是不是这样研磨不充分，是不是一定要用干样研磨？
2.我用的是0.05mol/L的磷酸--氢氧化钠缓冲液，是不是要用其它的缓冲液？
3.液氮研磨时先加入一点液氮预冷，然后再加藻样和液氮研磨，可能是含有水分的缘故，都结冰，怎样才能使研磨充分？
4.是不是方法有问题？
请多多指教，谢谢
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1楼 2009-03-16 13:50:51
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ryhq

★
zhumenjun(金币+1,VIP+0):谢谢 3-17 10:50
抢沙发顶贴了！！！！！
祝你早日找到答案！！！！
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2楼2009-03-17 09:49:31
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caidzh

金虫 (正式写手)

X战虫
★ ★
zhumenjun(金币+2,VIP+0):谢谢 3-17 17:11
１可以烘干后研磨，２用醋酸醋酸钠缓冲，或磷酸磷酸氢钠缓冲体系
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http://www.roxo.cn/cn/img.asp?list=Roxo
3楼2009-03-17 11:53:46
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zhumenjun

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by caidzh at 2009-3-17 11:53:
１可以烘干后研磨，２用醋酸醋酸钠缓冲，或磷酸磷酸氢钠缓冲体系

烘干会不会破坏藻样，多少度烘干，要烘干多久，谢谢
是研磨完再加缓冲溶液吗？

[ Last edited by zhumenjun on 2009-3-17 at 17:11 ]
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4楼2009-03-17 17:07:51
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xuhaojames

金虫 (正式写手)
★ ★
zhumenjun(金币+2,VIP+0):谢谢 3-17 17:37
水分影响不大，有时为了充分研磨还可以加水呢
0.05mol/L的磷酸--氢氧化钠缓冲液 问题应该不大，毕竟是按步骤
加入液氮成冰很自然，水分在所难免
具体情况我没见，
说不大好啊
就说光谱
效果不好可能一时操作，要不就是浓度，还有是酶的失活
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生如夏花之绚烂 死若秋叶之静美
5楼2009-03-17 17:24:35
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