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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酶切
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姜片123

新虫 (正式写手)

[交流] 酶切

实验新手，最近做pcr，然后用DMT酶在室温下酶切4个小时，然后转化。我不太懂为什么用DMT酶切，它的原理是什么。求指导！

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1楼 2018-03-21 16:33:28
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GRUBBY_WU

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
DMT酶是改良型的DpnI限制性内切酶，该酶可以有效地识别并切割腺嘌呤甲基化的GmATC序列，而不能切割非甲基化的GATC序列。PCR模板质粒来自细菌，其GATC的G是甲基化的，可以被DpnI酶消化，pcr扩增产物相同GATC不带甲基化，转化后生成的大部分克隆都是PCR产物而不是模板。这种酶和DpnI经常用于site-directed mutagenesis中消化原始模板。
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姜片123
2019更好更棒!
2楼2018-03-21 17:22:03
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姜片123

新虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by GRUBBY_WU at 2018-03-21 17:22:03
DMT酶是改良型的DpnI限制性内切酶，该酶可以有效地识别并切割腺嘌呤甲基化的GmATC序列，而不能切割非甲基化的GATC序列。PCR模板质粒来自细菌，其GATC的G是甲基化的，可以被DpnI酶消化，pcr扩增产物相同GATC不带甲基 ...

谢谢你～

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3楼2018-05-13 08:59:44
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