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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 细菌基因敲除质粒构建
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hemary

新虫 (初入文坛)
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细菌基因敲除质粒构建
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本人小白，刚刚接触细菌基因敲除，目前已经得到了同源臂片段，而且已经将两个同源臂连接到一起并且连接到cloning vector pJET上，酶切，胶回收，条带都正确，但是双酶切之后就是连接不到sucide vector上 每次做完转化板子上都没有俊。酶切位点都没有错，质粒上也有这两个位点。请大神们指点！！不胜感激！！

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1楼 2018-03-19 21:39:34
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hemary

新虫 (初入文坛)
大神们..求指点为什么都领没人说话呢

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13楼2018-03-19 21:56:32
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KNSS-Bio

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1,先看看载体抗生素抗性是否使用正确，2,换无缝克隆的方法试试

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23楼2018-03-19 22:32:24
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超世之英才

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
无缝克隆吧，换个试剂盒都比你多做几遍省钱多了。

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35楼2018-03-20 02:56:37
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
找公司做吧，就是个熟练问题

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38楼2018-03-20 07:44:24
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hemary

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
23楼: Originally posted by KNSS-Bio at 2018-03-19 22:32:24
1,先看看载体抗生素抗性是否使用正确，2,换无缝克隆的方法试试

没做过无缝克隆，求指导

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39楼2018-03-22 16:03:41
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hemary

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
35楼: Originally posted by 超世之英才 at 2018-03-20 02:56:37
无缝克隆吧，换个试剂盒都比你多做几遍省钱多了。

无缝克隆怎么做，求指导

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40楼2018-03-22 16:04:12
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开小猫

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
无缝克隆有试剂盒，按说明书做就行，可能还是载体或者片段酶切没切好

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41楼2018-04-03 18:29:21
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我是一个菠菜2楼
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梦想天行3楼
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wdxmu4楼
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我就是我VI5楼
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wangli52086楼
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莫落7楼
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BSilence9楼
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311473594810楼
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139307561511楼
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张勋果果12楼
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cherish0012814楼
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李保磊15楼
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M塞北16楼
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aishida17楼
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wuyuanqing20楼
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ln98533楼
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