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果果gxl2013金虫 (小有名气)
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请教大家小鼠肝脏组织Western blot的实验方法
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本人最近在做小鼠肝脏组织Western blot，RIPA裂解液，加PMSF，匀浆后14000r/min离心20分钟，取上清（尽量避开透明胶状粘液）。BCA法定量后加SDS-PAGE蛋白上样缓冲液，沸水浴5分钟变性。冷却后-80度保存。跑胶后发现约85KD的LRP1蛋白正常表达，而beta-actin（Santa）却怎么都不出。或者偶尔出2-3个孔（大部分时候都没有条带）。这个actin一抗我们实验室已经连续购买多次了都没有问题，并且其他同学使用相同抗体的实验结果（包括组织和细胞）都很正常，有同学做肾脏组织的也是正常出条带。唯独到我的肝脏组织就没有条带 。请问哪位大侠有好的解决办法啊？不胜感激 |
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果果gxl2013: 金币+1 2018-03-20 10:30:20
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这个好奇怪，动物组织你可以试试用GAPDH作内参试试 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-03-20 00:14:42
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如果只是机械研磨可能只研磨碎了一部分细胞。液氮研磨就是先在研钵机械研钵，然后倒入液氮，会结冰，然后再继续研磨。液氮温度很低，细胞内水分结冰体积变大，可以撑破细胞膜或者细胞壁，有利于提取蛋白。 发自小木虫Android客户端 |
10楼2018-04-03 09:29:34