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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 关于利用自杀性质粒敲除的问题
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qaswzxd123

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于利用自杀性质粒敲除的问题

新手，刚做敲除，有些问题请教大家。构建好的自杀性质粒pjq200sk接合进入受体菌，发生单交换，可以利用抗性筛选出来，然后通过蔗糖筛选双交换的重组子，得到敲除菌株。我的问题是，发生的单交换是质粒直接插入还是将目的基因替换？第二个问题，通过双交换删除筛选基因，是什么原理，单交换后的重组子和谁发生第二次重组以及如何删除筛选基因从而得到无痕敲除的？

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1楼 2018-03-15 21:01:44
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fncqj28

金虫 (小有名气)
★
qaswzxd123(金币+1): 谢谢参与
::::
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13楼2018-03-16 09:51:51
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renjiahong76

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单交换只是插入外源序列；双交换是缺失段内源序列重组，两重组才算真同源重组。
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18楼2018-04-05 22:25:17
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呆萌天狗

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一次重组和二次重组原理都是同源重组

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19楼2018-04-25 07:42:50
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harbor_ymj

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
好久以前做过，好像接近一半的敲除成功率。现在有crispr了，更方便了，再不济，Red系统也比自杀载体方便
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20楼2018-04-28 14:25:22
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nono20092楼
2018-03-15 22:07   回复  
qaswzxd123(金币+1): 谢谢参与
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aajjktk853楼
2018-03-15 22:32   回复  
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rxgxvhu374楼
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大虫19925楼
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grezwy756楼
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sz_kebaoyuan7楼
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jabfyzu918楼
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wtbccq5059楼
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ajjwrez0810楼
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tzynew11楼
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mhyvmqu76112楼
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祝福
rqcyzpt7114楼
2018-03-16 09:57   回复  
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tableman15楼
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uxucj4716楼
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jkhxybx56617楼
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