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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌生物膜结晶紫染色法测量成膜量测量方法求助
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蓝深川

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌生物膜结晶紫染色法测量成膜量测量方法求助 已有1人参与

对于特定纯菌想测一下在不同信号分子添加培养后的成膜量，搜到文献里面的步骤都是采用的结晶紫染色，96孔板培养。
但关于使用的仪器和光长有点困惑，使用的方法是：
将菌悬液按10%(V/V)接种量接种96孔板中，30 ℃、180 r · min-1下振荡培养24 h，轻轻倒去培养液，用PS缓冲液洗去生物膜表面浮游细菌;加入0.1%结晶紫水溶液200μL，室温染色5min，倒出染色液用去离子水轻轻洗涤2次;45°C烘箱干燥后，加乙醇溶液0.2 mL，洗脱吸附于生物膜上的染料，570 nm处的吸光值。
此处可否使用常规分光光度计代替酶标仪测量呢？另外论坛里看到帖子说测量的是600光长，和570比请问哪种使用更广泛呢？

看到了有用的帖子可是前辈已经毕业很久了只好自己开一个交流一下@天使托
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细菌生物膜制备和染色

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1楼 2018-03-14 17:12:20
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蓝深川

新虫 (初入文坛)
另外看到“用结晶紫染色前需要用甲醇先进行固定，这样的话就可以避免弃去结晶紫时，生物膜的丢失”有没有做过相关操作的前辈说一下这个说法可行吗，会不会不容易着色了
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2楼2018-03-14 17:20:09
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蓝深川

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lydia1997 at 2018-03-22 13:11:26
为什么你养生物膜，还要震振荡培养啊?为什么我看的文献结晶紫是2%，有的人是1%，实验小白，求交流，，，，，

没有，是震荡富集，然后在96孔板静止长。

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5楼2018-04-16 22:14:21
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长江以南

新虫 (初入文坛)
我们用的590nm。 然后也并没有 加热或者甲醇固定。都是有参考文献可查。只要自己一个流程 一个标准 就可以吧

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8楼2018-05-31 14:11:27
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wangyu0987

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 长江以南 at 2018-05-31 14:11:27
我们用的590nm。 然后也并没有 加热或者甲醇固定。都是有参考文献可查。只要自己一个流程 一个标准 就可以吧

培养时，96孔板需要盖上吗
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12楼2018-10-02 18:17:50
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
15楼: Originally posted by Timeless913 at 2018-11-19 14:18:38
大神请问 在用pbs洗之前不固定的话会影响后面的染色吗？
...

如果不固定，洗的时候会浪费掉很多吧
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···
17楼2018-11-19 20:44:12
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118徽

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
21楼: Originally posted by Timeless913 at 2018-11-21 23:29:35
哦哦好像是甲醇固定 我打算前一天晚上用甲醇固定一下 第二天洗然后染色 谢谢您给我回复我也不知道能不能成功 文献是有 但是上面没有这么详细的步骤 我目前看到的没有说要固定的 但是我也总感觉不固定的话洗的时候会 ...

请问，加入甲醇的时候，有没有发现有一层东西飘起来？我咋觉得甲醇加入使的部分生物膜飘起来？

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25楼2019-07-06 20:44:28
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普通回帖

Lydia1997

新虫 (小有名气)
为什么你养生物膜，还要震振荡培养啊?为什么我看的文献结晶紫是2%，有的人是1%，实验小白，求交流，，，，，

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3楼2018-03-22 13:11:26
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

我们用96孔板培养时是静置培养的，还有96孔板好像用普通分光光度计没法测量
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···
4楼2018-03-22 14:45:19
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呆萌天狗

新虫 (正式写手)
这方面的文献一抓一大把，不用上来问了，自己找两篇看看最靠谱

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6楼2018-04-17 15:13:39
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Anderson-PM

木虫 (正式写手)
我最近也在做生物膜，可以互相交流

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你还好吗
7楼2018-05-28 10:30:34
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summuryi

新虫 (小有名气)
请问为什么有的用570nm 有的用590nm

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9楼2018-09-06 20:21:48
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蓝深川

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Lydia1997 at 2018-03-22 13:11:26
为什么你养生物膜，还要震振荡培养啊?为什么我看的文献结晶紫是2%，有的人是1%，实验小白，求交流，，，，，

我觉得1%已经够浓了，你配以下就知道了

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10楼2018-09-07 10:11:00
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