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金属杆

新虫 (初入文坛)

[求助] 长度超过20000bp的质粒怎么扩增 已有2人参与

最近在扩增一个大质粒，插入基因差不多有15000bp的长度，载体是pCDNA3.1。尝试用了好几种感受态细胞转化都长不出来，只有HST08感受态细胞长出了几个单菌落，但是挑菌提质粒电泳检测没有看到质粒条带。请问这么大的质粒扩增还需要怎么做法？
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1楼 2018-03-07 15:33:13
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有两种可能，一个是没有连上，一个是连上了转化不进去，可以用电转感受态试下。
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总会出现一个温柔的人，让你变得温暖，然后默默离开。
2楼2018-03-07 15:47:34
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金属杆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 阿门阿前1991 at 2018-03-07 15:47:34
有两种可能，一个是没有连上，一个是连上了转化不进去，可以用电转感受态试下。

这已经是一个完整的质粒了，别人给的。可能是就是不知道长得那几个单菌落从哪来的，也提不出质粒。
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3楼2018-03-07 15:54:56
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试电转化吧，我们实验室160k的质粒很常规的操作是完全没有问题的。
赞一下 回复此楼
想做一位科研好人
4楼2018-03-07 16:33:26
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