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一个关于报告基因的问题 已有1人参与
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最近在写标书，实验设计上有点小问题，请求大家帮忙解答，我想看一个蛋白在缺氧条件下的表达情况，如果转染这个蛋白-gfp质粒，可以在荧光显微镜下实时观察荧光强度，初步确定缺氧对他的影响吗？还有我想采用共培养的体系，如果这个蛋白升高，他会提高vegf的表达，那么我可以用transwell板培养两种细胞，上室放另一种细胞，转vegf-gfp质粒，然后看共培养时，vegf的荧光表达，确定下室缺氧，对上室vegf的表达荧光强度影响，这个办法可以吗 @biostar2009 @biostar2009 @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端 |
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yudaoqian88
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【答案】应助回帖
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我不是专业的，随便根据我的理解说点，对后面的vegf不了解，不懂. 我知道别人做蛋白方面的实验，有用western做的，看蛋白条带大小混含量变化。当然，前提是要有抗体。这个实验设计应该是没有问题的，但我有两个小疑问，不知道会不会是个问题。 蛋白和报告基因融合是可以看到荧光的，关键的一点是，如果缺氧处理后，原始蛋白含量是升高的，那么似乎对你这个带标签的蛋白的含量不会有影响，也就看不出亮度差别，这个时候就需要考虑把启动子挂报告基因啦。如果是降低的，倒是会讲降解你的原始蛋白和融合蛋白，导致荧光减弱。 还要考虑蛋白降解是从那一端，会不会带标签以后影响他的程序化降解呢，是不是需要考虑也挂报告基因到前端。我猜的，不知道对不对，关键看别人是否这么干过吧。 有啥方法我也想看看，希望对你有帮助。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2018-03-04 01:29:02