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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA提取得率低
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欣晴5832

金虫 (小有名气)

[交流] DNA提取得率低

最近提DNA时在植物样上加CTAB，在离心管底部总是有结块，65度水浴一个小时有的都不怎么溶，又不敢剧烈晃动，这样继续做的结果就是DNA得率低，还请各位给我提一点建议，谢谢！
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1楼 2009-03-10 23:46:13
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论，~ 3-11 14:03
应该是多酚类的一些杂质，如果粘稠的话说明是多糖，建议在加入氯仿异戊醇（24：1）抽提的时候增加颠倒上下混合时间；加入CTAB吸上清的时候注意，最后一次一定要保证没有固体吸上来.
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-03-10 23:59:07
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
我使用的实验材料是植物干样，干样本身就很难溶到CTAB当中。另外还有一个问题是加入氯仿异戊醇后离心的上清液特别浑浊，感觉含有很多色素，请问有没有什么方法可以比较有效的去除一部分色素呀？谢谢！
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3楼2009-03-11 08:24:39
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zl382

铁虫 (小有名气)
那蓝枪头剪下一点，然后再用酒精灯稍烧一下，使剪过的边缘变光滑。然后轻轻抽吸不溶的结块，DNA没有想象的那么娇气会断掉或者用枪头轻柔搅匀都可以。这个东西不用太过于小心，该放手做就要放手做，这样才能提好的，祝顺！
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后退，绝对是无路可走！
4楼2009-03-11 08:35:00
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
哦，我之前也用过您说的方法，只是有点不太敢搅动，就怕降解，那我下次提的时候再试一下，谢谢！那怎么样可以比较有效的去除色素呢？
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5楼2009-03-11 08:40:08
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zl382

铁虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):辛苦~ 3-11 14:03
我提的时候，一般用氯仿抽两次就没什么颜色了，用异丙醇沉淀后将丝状沉淀挑出来就没绿色了，我一般不离心，只要能挑出来的部分，剩下的即便是离心拿到，对后面试验出了阻碍也没什么帮助，所以还是要适当地舍弃。其实要那么多也用不上。
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后退，绝对是无路可走！
6楼2009-03-11 11:11:32
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
第一遍用氯仿异戊醇抽提的时候就很难出上清，上清液特别浑浊，有的时候会重复离心，效果依然不好，后来就干脆直接那样抽了；第二遍抽提的时候上清液中有很多的蛋白漂着，这就特别影响得率，今天电泳看了一下提出来的特别微量
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7楼2009-03-12 13:03:47
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