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goodboy520

铜虫 (小有名气)

[交流] 福林酚法测多肽含量线性不好?

标准曲线的制备 精密移取对照液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml,分别置于具塞试管中,各加水至1ml,再分别加入碱性铜试液0.1ml,摇匀,各加入福林酚试液(取福林试液中的储备液1-16)4.0ml,立即混匀,置55摄氏度  水浴中准确反应5分钟, 后于冷水浴中10分钟,照分光光度法,在650nm的波长处测定吸光度。
      曲线线性就是达不到要求,大家有没做过,指导下,不胜感激!

[ Last edited by goodboy520 on 2009-3-10 at 09:21 ]
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学海无涯
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suly13

金虫 (小有名气)

佐龙佑虎双花大红棍

★ ★
karl2100(金币+2,VIP+0):多谢指教! 3-10 13:28
LZ的方法应该不成问题,我分析造成线性不好的原因可能有下面几种:
1.对反应时间、反应温度的控制环节没掌握好;
2.样品测定时间的间隔没控制好;(这点很重要,显色反应一般在测定过程中会造成吸光度的波动)
3.紫外的调试(自调零即及其调零、空白调零等)

我想严格控制上述条件的话,应该会成良好的线性。如果线性仍不好,LZ 可能要换另外的含量测定方法了。

别泄气,紫外本身就是比较麻烦的含测方法,LZ 加油!
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2楼2009-03-10 10:35:20
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goodboy520

铜虫 (小有名气)

谢谢!我在想是不是试剂问题,我们的福林酚试剂是从药检所买的,1到16稀释
或是对照曲线浓度太低了?
学海无涯
3楼2009-03-10 11:15:03
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suly13

金虫 (小有名气)

佐龙佑虎双花大红棍


clkk216(金币+1,VIP+0):谢谢参与虫友讨论~! 3-10 21:03
LZ可以做个样品在全波长扫描下啊,一方面能确定最大吸收峰(可能与文献报道有点区别的哦),另一方面能确定标准品的曲线范围。
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4楼2009-03-10 11:17:07
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goodboy520

铜虫 (小有名气)

谢谢,能不能帮忙查下吸光度值大概多少?
学海无涯
5楼2009-03-10 11:39:57
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suly13

金虫 (小有名气)

佐龙佑虎双花大红棍


karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 3-11 00:44
文献报道多肽含量测定比较少,看到一篇波长是“278nm”,LZ还是试下全波长扫描吧,不用看文献即能看出是否有最大吸收及最大吸收波长。
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6楼2009-03-10 11:54:24
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