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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 关于大肠工程菌能否表达的问题？
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xuyuzhi

新虫 (正式写手)
您好，我是梓熙（一道）生物徐玉智。主营基因合成、探针合成、snp、str检测和DEL。现在我们公司招聘兼职技术帖撰写（基本工资+任务奖励）和兼职技术顾问（5-10万/年）。欢迎详询15600703528

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11楼2018-03-10 07:59:59
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zhangnan163

银虫 (初入文坛)
★
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如果确定载体构建的没有问题，可以尝试一下添加促溶的标签，低温诱导
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12楼2018-03-28 10:51:04
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一夕半夏

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 吴秋兰 at 2018-02-27 18:05:05
这种情况怎么办呢
...

可以通过融合表达或分子伴侣促进可溶性表达，但是作用根据蛋白不同有较大差异；或者大量表达包涵体，收集后再通过变复性处理，但活性一般会受影响
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13楼2018-04-09 09:54:55
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糊涂蛋的日常

新虫 (初入文坛)
★
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怎么就能确定没有表达呢，可能是表达量低，大肠杆菌表达包涵体是很常见的问题。如果带走标签的话，可以做个wb看看是不是有表达，只是普通蛋白胶看不出来。或者说，要是菌诱导后长不起来，那可能是蛋白有毒性。

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14楼2018-04-17 17:06:49
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Crazy cat

铜虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by 吴秋兰 at 2018-02-27 18:05:05
这种情况怎么办呢
...

包涵体可以用变性分离蛋白，之后再通过复性，不过损失比较大，一般表达量比较大才会这么做
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15楼2018-06-04 11:49:24
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丰晖生物

新虫 (初入文坛)
★
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可能更多的还是质粒方面的原因把，表达载体的选择方面的。
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16楼2018-06-27 13:53:15
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5就是5丫丫

新虫 (初入文坛)
★
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是酶无法表达呢，还是表达的蛋白在沉淀中呢？还是表达了没有酶活呢？如果是无法表达的话可能跟基因序列本身以及启动子有关系，一般就算你没诱导好也应该是有微弱表达的，建议可以先对载体启动子区域进行测序，一个个的排查问题可能出现的地方，一个个分析，这样才能找到问题，祝实验顺利
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17楼2018-07-06 17:32:47
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厚德求是

木虫 (著名写手)
★
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这个问题也困扰我，我想这个和序列有关系，也和你使用的载体和试剂有关系，如果对照正常而目标片段表达不了的话，可能就是序列问题了。
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18楼2018-08-11 00:12:17
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zxwtian111

新虫 (初入文坛)
★
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酶的表达涉及很多问题
1.看看是否成功的构建在质粒上，菌落PCR验证，或者测序验证
2.如果条件允许，跑一跑蛋白胶看看，是否有目的条带生成，更具生成的结果，在进行下一步实验，有目的条带好弄，没有就稍微复杂一些
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19楼2018-08-21 20:27:48
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热闹好呀

新虫 (小有名气)
★
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可能是和其它质粒相矛盾

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20楼2018-12-10 08:08:47
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