| 查看: 869 | 回复: 3 | ||
小汰宝金虫 (正式写手)
|
[求助]
BAC文库做表达转化，一开始能检测到产物，但是越来越少，最后重复不出来
|
|
从师姐手里拿到一份当时他们构建的BAC文库，是一个土壤环境里的宏基因组打断了以后每个BAC连了约200kb的片段，导进了大肠杆菌，甘油菌形式存在96孔板里。 我们把孔板里的菌接到平板培养，培养结束后抠点平板上的菌泥进96孔板做反应，用显色法检测目标产物。 第一次做的时候，在2000多株菌的文库里出现了40度株可以显色的菌，其中有两株经过复筛已经在液相上验证出有目标产物峰。 想重复一下，结果无论是从原始孔板开始做，还是从我们接的平板上的菌开始做，重复完了都显色很淡，再重复一次，就检测不到显色了，液相更是检测不到产物了。 我们以为是把菌反复从-80℃里拿出来造成了冻融裂解，就去问师姐要了当时他们备份的菌库 结果又出现这个情况：第一次做的时候出现了显色，再而衰三而竭... 想知道这是什么问题，因为质粒比较大，现在也不敢贸然提质粒去测序，但是一直重复不出来，不知道该怎么进行下去 |
回复此楼» 猜你喜欢
什么是人一生最重要的？
已经有6人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有11人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有9人回复
-
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有5人回复
-
280求调剂
已经有3人回复
-
面上可以超过30页吧？
已经有11人回复
-
版面费该交吗
已经有15人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有18人回复
小汰宝
金虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1382.7
- 散金: 216
- 红花: 3
- 帖子: 577
- 在线: 44.9小时
- 虫号: 3897142
- 注册: 2015-05-29
- 专业: 生物化工与食品化工
2楼2018-02-01 20:20:49
3楼2018-02-26 16:33:08
4楼2018-03-15 00:10:29