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a-葡萄糖苷酶活性抑制实验，没有颜色变化 已有2人参与
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| a-葡萄糖苷酶活性抑制实验，加入底物PNPG后，在酶的水解下变成NPG，在碱性条件下会变黄，按照参考文献来的，但我加完后颜色没有变化啊，溶液还是无色。我又加了过量的酶，还是无色，这是什么原因呢？ |
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对硝基苯酚（PNP）标准曲线制作 采用磷酸缓冲液（pH 6.8）配制1 000 μmol•L-1 PNP溶液，稀释成400，300，200，150，100，50，25，5，0 μmol•L-1。分别取7 种不同浓度的PNP 溶液各100 μL，加入0.2 moL•L-1 Na2CO3 溶液80 μL，混匀，在405 nm 下测定A 值，测3 组取平均值。以A 值为纵坐标，对硝基苯酚浓度为横坐标，做出PNP溶液标准曲线。(已经测定,颜色有线性变化） α-葡萄糖苷酶活力的测定 酶活力单位定义：在37 ℃，pH 6.8 条件下，每分钟水解底物所产生1 μmoL 对硝基苯酚PNP的酶量，规定为1 个酶活力单位（U）。规定在37℃、pH 6．8条件下，降低1 μmol PNP所需的抑制剂的量为一个抑制剂活力单位(U)。 于96微孔板中，加入50μL缓冲液，加入20 μL用0.1M磷酸缓冲液(pH6.8) 溶解的a-葡萄糖苷酶溶液(0.2 U/mL)，振匀后于37℃恒温15 min，每孔5s间隔加入20μL 用0.1M磷酸缓冲液(pH6.8) 溶解的2.5mmol/L 4-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷(4-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside，PNPG)溶液振匀，在37℃恒温反应15 min，加入80 μL Na2CO3溶液(0.2 mol/L)终止酶促反应，置于405 nm波长处测吸光度(A)。每个样品重复3次取平均值。10μL待测液(O.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.O mg/mL) 样品液、阿卡波糖溶液（阳性对照），同量缓冲液的作为空白对照。（酶提高10倍，底物也提高10倍，都不反应，所有组都无色，没有生成PNP。求助，楼主！  ） |
5楼2018-03-19 15:29:38
snmrna
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4楼2018-02-05 13:24:44
