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DNA基因重組後的奇怪現象,希望大神給予援助
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我的Template是: 5'-.....AGGCCGCATCCATGGATGATT.......................TTACCGTTTGGTAA CTCGAT .....-3' 3'-......TCCGGCGTAGGTACCTACTAA......................AATGGCAAACCATTGAGCTC.....-3' 底線依序分別為NcoI、XhoI 刀口 由於要接到pET29a(+) vector 上,且刀口要改成NdeI、XhoI。 Primer設計如下: Forward-primer:5'- CGC CATATGATTACCCCTGTTCAAAAAACCGTTTGTTGCAG -3' Reverse-primer: 5'- GCG CTCGAGCCAAACGGTAACATTGCTAC -3' PCR 跑電泳位置正確,之後pET29a(+) vector、純化好的PCR product 均用NdeI、XhoI酶切。 ligation,再送入DH5a 宿主菌內好後, 之後用T7、T7t primer 定序,結果卻是如下: T7定序結果 :5'-TAACGACCGCATCCATGGATGATTACCC..... .....-3' T7t定序結果 : 無�?號 請問這是因為Forward-primer 保護鹼基少於6 base 緣故嗎? (新設定的Forward-primer: GGAATTC CATATGATT..... 應該是沒問題) 請求給予指教,謝謝  |
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