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unciawang

金虫 (正式写手)

[求助] 新手第一次做QPCR,有些问题想问大家已有1人参与

我用相同浓度的cDNA样品,为什么各个样品的β-actin以及18S内参起跳值都不一样,最大的相差十几个循环。求大神解答!!!!!用的是罗氏96仪器,trans试剂盒。

新手第一次做QPCR,有些问题想问大家
qqq.png@biostar2009@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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我欲乘风归去

木虫 (正式写手)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-01-22 07:52:03
测的是反转录后的cDNA浓度还是反转录前RNA浓度? 如果是前者,反转录后的cDNA浓度是不能测量的,里面有dNTP,测出来的浓度实际上是dNTP浓度,你需要在反转录前把RNA浓度调成一致再进行反转录。

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9楼2018-01-20 15:57:25
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chen5805

至尊木虫 (著名写手)

资深木虫

很可能与加样的准确性有关。

发自小木虫Android客户端
2楼2018-01-19 20:39:45
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chen5805

至尊木虫 (著名写手)

资深木虫

3楼2018-01-19 20:40:21
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unciawang

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chen5805 at 2018-01-19 20:40:21
每个样品有3个重复吗?

每个样都设了一个副孔
4楼2018-01-19 20:43:46
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