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考马斯亮蓝法测不出脂肪酶的浓度
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| 先根据考马斯亮蓝法做出标准曲线(以牛血清白蛋白为标准蛋白)。将脂肪酶粉末溶于tris-HCl缓冲液中,离心除去不溶部分,取上清液。将1mL 自由酶溶液加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,测出的OD值对应于标准曲线,其自由酶的浓度几乎为0。然后将6mL 自由酶溶液加入5mL考马斯亮蓝溶液,此时溶液明显变蓝,但测出的OD值对应于标准曲线,发现酶的浓度还是几乎为0。所以想请教一下虫友,这个可能的原因是什么呢?操作上是不是有什么不规范呢? |
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