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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE测不到两端
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杨惠源

新虫 (初入文坛)
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RACE测不到两端
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目前在做两个基因的RACE。我是克隆完送的测序，根据预测结果能看得出一个基因的3’端还差十多bp 没到终止密码子就开始出现AAAAAAAAA 和接头引物了，，，另一个基因5’PACE 也出现这种问题，还差大概20bp 不到头就出现GGGGGGGG接头引物序列了。一开始以为是测序出问题，换了好几家测序结果还是一样，快愁哭了……看了有的帖子说可能是模板两端有降解的原因，不知道究竟是不是这个原因有没有哪个大神懂的话麻烦帮我一下，太感谢了

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1楼 2018-01-17 01:09:44
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先能不能排除是由于中间这些序列和你的两个接头引物互补？如果排除了这个原因，那就是两端稍微有些降解了

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7楼2018-01-17 07:33:21
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杨惠源

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-17 07:33:21
首先能不能排除是由于中间这些序列和你的两个接头引物互补？如果排除了这个原因，那就是两端稍微有些降解了

感谢，现在排除了接头引物互补的可能性，，，我重新换模板做做试试

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8楼2018-01-17 10:05:31
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 杨惠源 at 2018-01-17 10:05:31
感谢，现在排除了接头引物互补的可能性，，，我重新换模板做做试试
...

你们这个做race不是用的试剂盒吧？
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10楼2018-01-17 10:14:43
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杨惠源

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-01-17 10:14:43
你们这个做race不是用的试剂盒吧？...

对，实验室一直都是自己配的，我直接拿来用的

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11楼2018-01-17 10:15:48
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渊博震天

版主 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by 杨惠源 at 2018-01-17 10:15:48
对，实验室一直都是自己配的，我直接拿来用的
...

可否发我一份protocol，我看看呢？

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12楼2018-01-17 11:32:43
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mapenggao2楼
2018-01-17 01:09   回复  
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ljptp3楼
2018-01-17 01:11   回复  
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hbabc4楼
2018-01-17 01:16   回复  
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rayboyoscar5楼
2018-01-17 01:22   回复  
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cheng42006楼
2018-01-17 01:52   回复  
杨惠源(金币+1): 谢谢参与
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渊博震天9楼
2018-01-17 10:13   回复  
引用回帖:
8楼: Originally posted by 杨惠源 at 2018-01-17 10:05:31 感谢，现在排除了接头引物互补的可能性，，，我重新换模板做做试试 ...

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