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实验专栏丨EAE模型制备，你做好准备了吗? 已有1人参与
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1、完全弗氏佐剂(CFA)的配制 完全弗氏佐剂的配制：20 ml弗氏不完全佐剂(IFA)中加入10 mg结核分枝杆菌。漩涡混合仪充分混匀至悬浊状态，置于4℃冰箱冷藏备用，使用前再次充分漩涡混匀至悬浊状态。 2、百日咳毒素储存液(PTX) 配制 百日咳毒素储存液配制：将整瓶百日咳毒素(50μg)中加入500μl PBS，充分混匀，百日咳毒素的终浓度为0.1μg/μl，储存于4℃冰箱。诱导EAE时每只小鼠(大约18g左右)的用量为0.2μg，即2μl。 3、抗原佐剂乳化物的制备 MOG 35-55短肽购回储存于-80℃冰箱。 MOG 35-55工作液的配制：10 mg的MOG 35-55溶于冷的500μl PBS 中，吹吸混匀(禁止涡旋)。此时MOG 35-55多肽的浓度为20μg/μl，分装于0.2 ml的EP管中，储存于-80℃冰箱。 乳化物的制备：MOG 35-55多肽工作液按照所需剂量与预冷PBS充分混合，然后加入等体积的CFA，涡旋震荡充分混合。将混合液缓慢加入两只用三通相连的注射器中，尽量排除气泡，注射器互相推拉吹吸，直至形成油包水混合物为止。因为抗原多肽在常温中易于变性，所以整个乳化过程应该尽量置于冰上，保持低温。 EAE模型制备 ① 麻醉小鼠，并对小鼠注射部位进行75%酒精消毒； ② 选取小鼠双侧下肢后背皮肤为注射点，每侧100μl，皮下注射抗原佐剂乳化物，共注射 200μl，同时腹腔注射200 ng的百日咳毒素； ③ 48 h后再次腹腔注射百日咳毒素200 ng。 EAE小鼠模型临床评分分级标准 小鼠经MOG免疫后，常规饲养小鼠，观察动物的一般情况。小鼠在致敏后7-14天发病，采用国际通用评分标准对小鼠进行临床评分，每天检查并记录疾病的临床神经功能分级，直至 MOG 免疫后 30 天。小鼠 EAE 动物模型神经功能评分(参考 Stromnes [77,78] 等方法的临床评分标准)，具体标准如下：1 分，尾巴瘫痪无力，无法卷起；2 分，后肢无力，部分共济失调；2.5 分，单侧后肢瘫痪；3 分，双侧后肢瘫痪；3.5 分，双侧后肢瘫痪，单侧前肢无力；4分，双侧后肢瘫痪伴前肢瘫痪；5 分，濒死状态或死亡。 参考文献：lincRNA-Cox2调节巨噬细胞/小胶质细胞自噬和实验性自身免疫脑脊髓炎机制研究 |
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2楼2018-04-17 11:13:02
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