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请教几道生物化学与分子生物化学题目
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1，已知一段插入的DNA序列，要在前面加6个组氨酸，后面也加6个组氨酸以便于纯化，设计一对引物，有18个核苷酸可与已知DNA配对 2，真和基因中含大量非编码序列如转座子，内含子，这些非编码序列真的是“垃圾”吗？（2）几年来小分子RNA与基因表型遗传学有很大突破，有人认为“中心法则”已经过时应该被取代，你有什么想法？ 3、近年来人们对真核基因调控理论有了深入的认识，现在大家普遍接受“unified theory”的理论，请你谈谈你对该理论的理解及你的观点。 4.已知一个蛋白质的全长cDNA,设计一个实验步骤从cDNA开始提纯此蛋白 |
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1 选取目标基因前后各18个设计为引物 For取正向 Rev取反向互补 然后5‘端加上六个His密码子就行了 然后外端再加NdeI/HindIII酶切位点 PCR 克隆到表达载体 其实一端带就够了 找一个His的载体 在它没有的一端引物上加 一般一端His足够纯化 Domain的克隆Linker区选择不当可能影响折叠 挂柱就不好 再考虑加长或换C端 2 内含子当然有用 但是精确功能不清楚 国际上有很多课题组做 有很多文章 转座子不完全是非编码区 可以编码转座酶 转座是进化遗传下来的 是各物种之间和物种内部遗传信息交流的遗迹 谁说中心法则过时了 任何新的发现都是对旧的规律的修正 RNA永远代替不了DNA 当然没有RNA的分子生物学也不再是分子生物学 3 没听过unified theory 4 没看懂什么意思 知cDNA是表达吧 那就P 然后表达蛋白收蛋白 提纯是自然分离吗？ 那和是否知道cDNA序列没有关系啊 |
2楼2009-03-03 23:32:29
3楼2009-03-04 12:43:42
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unified theory 除了少数的RNA病毒之外，DNA分子几乎是所有生物遗传信息的携带者。DNA分子携带着两类不同的遗传信息。一类是负责蛋白质氨基酸组成的信息，以众所周知的三联体密码子的方式进行编码。DNA分子上所携带的另一类遗传信息是关于基因选择性表达的信息。在原核生物，结构基因占基因组较大的比例。然而在高等真核生物，基因组中大部分DNA序列是用来编码基因选择性表达的遗传信息，即调控信息。在细胞周期的不同时相中，个体发育的不同阶段中，不同的器官和组织中，以及在不同的外界环境下，特定基因的表达或关闭，表达量的增高或降低，反映了基因表达模式的差异。基因的这种差异表达，是生物体完成基本生命活动以及对外界刺激作出应答的分子基础。阐明基因选择性表达所依赖的调控信息及其相互作用的分子机制，已经成为功能基因组学领域内基因表达调控研究国际竞争的焦点。 近年来基因组学的不断发展，为基因表达调控研究提供了许多新的技术手段和实验思路。首先，从一维的基因序列到三维的活性蛋白质的整个过程中，基因表达的调节与控制存在于转录前染色质水平上的结构调整，转录，转录后加工，翻译以及翻译后修饰等多个环节。它们之间的相互联系与交互作用构成了基因表达调控的网络系统（A unified theory of gene expression）。人们开始从研究单一的调控环节拓展到深入探讨它们之间的相互联系及其控制过程。其次，单个基因点、线式的调控也已经逐渐拓展为立体层面上多基因、基因簇以至整个基因组的调控网络。与此同时，基因组测序研究、生物信息学等多学科的交叉与渗透，不仅为基因本身的编码序列提供了丰富的数据资源，而且为高通量系统鉴定和分析基因组内调控序列以及最终阐明基因表达的调控网络提供了多层次的信息基础。（selve的回答） |
4楼2009-03-04 20:07:47
5楼2009-03-04 20:10:54
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