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PCR反应中使用高保真Taq酶扩增无条带怎么办？？
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| 各位大虾，我用普通Taq酶可扩增出目的条带，可是换了高保真酶，同样反应条件就扩不出目的条带，这是怎么回事啊？？请多多指教！ |
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3楼2009-03-03 21:50:37
shenye.judy
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2楼2009-03-03 20:57:31
chemifunan
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楼主你使用的是哪种高保真酶 高保真酶有高保真酶的使用方法 这是通用性的 就是不考虑PCR条件 仅仅酶本身就是有这种特性 比如Pfu酶的使用和Taq基本一样 就是别忘了降速 它0.5k/min 所以1k要2min 而Primer Star属于高退火效率高保真 所以变性和退火时间要改为10s 变性要在98度 速度同Taq仍然1k/min 根据买来的酶的使用说明用 如果确定以上酶的使用方法本身没有问题 再根据初始化条件进行优化 但不是Taq酶的条件重复 高保真和Taq没有关系 它只是多一个3-外切 PCR条件和Taq条件不一样 P不出来是正常的 如果你本来需要高保真 那就直接用它试条件P 不要先用Taq试能不能P出来 |
4楼2009-03-03 23:15:07
chemifunan
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5楼2009-03-03 23:17:26