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WHJ911016

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化 已有3人参与

我是纯化蛋白的新手,用AKTA系统镍柱纯化蛋白后想用凝胶柱纯化。但镍柱纯化后蛋白体积较大一般在100ml左右,而我们的凝胶柱上样量最大才能是5 ml,一般用什么方法浓缩较好啊,我用PEG浓缩时常出现沉淀怎么办啊?有没有大神给点建议啊,谢谢啦。
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

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超滤等等,为了防止聚集也可以尝试加一些添加剂,比如尿素等
2楼2018-01-10 09:03:55
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易科学平台

禁虫 (小有名气)

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3楼2018-01-10 23:40:05
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
WHJ911016: 金币+5 2018-01-30 15:20:09
一是多次上样;二是浓缩后上样。浓缩可以通过超滤或PEG,为防止沉淀可以加入一些添加剂如Triton X-100, Tween-20等,防止蛋白之间的一些作用而沉淀。
4楼2018-01-11 15:24:57
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zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
WHJ911016: 金币+5 2018-01-30 15:20:28
超滤浓缩比较实际。猜测:既然能过凝胶柱,说明你这100ml的蛋白浓度不是很高,那么可以考虑减少镍填料的使用量,或者洗脱时用无盐buffer加咪唑洗脱,这样之后用少量离子柱填料结合,高盐一步洗脱,体积也不会那么大,前提是你的蛋白在低盐稳定。
5楼2018-01-11 20:13:55
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