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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白纯化
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WHJ911016

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化 已有3人参与

我是纯化蛋白的新手，用AKTA系统镍柱纯化蛋白后想用凝胶柱纯化。但镍柱纯化后蛋白体积较大一般在100ml左右，而我们的凝胶柱上样量最大才能是5 ml，一般用什么方法浓缩较好啊，我用PEG浓缩时常出现沉淀怎么办啊？有没有大神给点建议啊，谢谢啦。
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1楼 2018-01-09 20:54:03
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超滤等等，为了防止聚集也可以尝试加一些添加剂，比如尿素等
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2楼2018-01-10 09:03:55
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易科学平台

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2018-01-10 23:40:05
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WHJ911016: 金币+5 2018-01-30 15:20:09
一是多次上样；二是浓缩后上样。浓缩可以通过超滤或PEG，为防止沉淀可以加入一些添加剂如Triton X-100, Tween-20等，防止蛋白之间的一些作用而沉淀。
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4楼2018-01-11 15:24:57
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zsygxh

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
WHJ911016: 金币+5 2018-01-30 15:20:28
超滤浓缩比较实际。猜测：既然能过凝胶柱，说明你这100ml的蛋白浓度不是很高，那么可以考虑减少镍填料的使用量，或者洗脱时用无盐buffer加咪唑洗脱，这样之后用少量离子柱填料结合，高盐一步洗脱，体积也不会那么大，前提是你的蛋白在低盐稳定。
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5楼2018-01-11 20:13:55
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