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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 抗体标记是在抗体的Fc上标记的嘛？
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丶简简单单

无虫 (小有名气)

[求助] 抗体标记是在抗体的Fc上标记的嘛？ 已有1人参与

最近准备做抗体标记实验，在学习这方面的知识过程中，有一个问题，抗体标记是在Fc上标记的嘛？原理是什么？赖氨酸都在Fc上？还是这个标记是随机的，在可变区也可以标记？HRP标记或FITC标记的原理已经了解。
有了解的大神帮忙解答一下。先谢啦。
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1楼 2018-01-05 11:30:54
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丶简简单单

无虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy0305 at 2018-01-05 13:36:48
赖氨酸偶联是通过化学反应将荧光分子或者HRP直接或者间接标记在赖氨酸的氨基上，这个过程是随机的，可能标记在了Fc端，也可能标记在的Fab端，这个具体得看标记的个数和抗体本身的特性。赖氨酸在抗体序列上的排布也是 ...

谢谢您的回答，我了解到了，原来不是只在Fc端标记呢。
那么标记后的抗体的特异性会改变嘛？标记的个数是一个抗体上标记的荧光分子或HRP的个数嘛，怎么计算？一般做一次标记，抗体都会标记上嘛？
我的问题有点多...
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3楼2018-01-05 13:58:57
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
丶简简单单: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2018-01-05 13:54:17
赖氨酸偶联是通过化学反应将荧光分子或者HRP直接或者间接标记在赖氨酸的氨基上，这个过程是随机的，可能标记在了Fc端，也可能标记在的Fab端，这个具体得看标记的个数和抗体本身的特性。赖氨酸在抗体序列上的排布也是不均一的，Fc端和Fab端均可能有
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2楼2018-01-05 13:36:48
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 丶简简单单 at 2018-01-05 13:58:57
谢谢您的回答，我了解到了，原来不是只在Fc端标记呢。
那么标记后的抗体的特异性会改变嘛？标记的个数是一个抗体上标记的荧光分子或HRP的个数嘛，怎么计算？一般做一次标记，抗体都会标记上嘛？
我的问题有点多. ...

这个得具体情况具体分析，如果标记的分子结合在抗体的可变区的CDR区域，这个可能会对抗体的特异性和亲和力产生一定的影响，需要通过具体的实验测定。如果影响不大还是能够继续使用的，很多供应商都有标记好的荧光抗体和酶联抗体出售

一个抗体标记的荧光分子和HRP数目可以通过紫外吸光度法在280nm测定抗体蛋白的吸收峰和荧光分子特定波长的吸收峰进行组合计算得到，这个就需要根据荧光分子和HRP的光吸收特性选择和查阅合适的公式了。注意荧光标记后，荧光分子需要去除干净，不然会对检测的结果产生比较大的干扰。
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4楼2018-01-05 14:21:46
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