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liang918

金虫 (小有名气)

[交流] 请问a-tubulin,actin

请问为什么免疫印迹实验要用a-tubulin,actin作对照?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 09:30 ]
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爱老婆,爱工作
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liang918

金虫 (小有名气)

还有Monoclonal anti–a-tubulin antibody (Sigma) was applied
to stain a-tubulin as a loading control.中loading control什么意思?
爱老婆,爱工作
2楼2009-03-02 21:19:40
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

我想知道,你的本意是不是想问western blot实验中,为什么要用tublin或actin做对照……
貌似看不懂想问什么
3楼2009-03-02 21:35:10
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liang918

金虫 (小有名气)

是这个意思,刚打错了
爱老婆,爱工作
4楼2009-03-02 21:42:59
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

比如说,有10个细胞样品,同样来抽蛋白
由于细胞数量和抽的过程中的问题,最终的蛋白浓度肯定不会是一样的
就算用BCA定量,那个吸光度也只能说取个平均值
接着稀释,调整浓度,稀释的时候也会有误差
电泳上样的时候,又会产生误差

这些误差,就需要一个衡定持续表达的蛋白来校正
目前认为actin、tublin、GAPDH等可以作为内参来校正
如果没有这些内参,那实验结果就说不准了
这个条带粗一点,到底是因为上样上多了一点,还是浓度高了一些呢?

内参的意义不仅仅是一个loading control,也即是修正上样的误差而已
还能在一定程度上校正其他操作产生的误差
必要时应该同时使用两个内参
5楼2009-03-02 21:47:51
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liang918

金虫 (小有名气)

很详细,很感谢
爱老婆,爱工作
6楼2009-03-02 21:56:59
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-3-2 21:47:
比如说,有10个细胞样品,同样来抽蛋白
由于细胞数量和抽的过程中的问题,最终的蛋白浓度肯定不会是一样的
就算用BCA定量,那个吸光度也只能说取个平均值
接着稀释,调整浓度,稀释的时候也会有误差
电泳上样 ...

完全正确,主要就是看你的上样量是否均匀,当你做不同时间的某个基因的表达量的时候,这个参考蛋白非常重要,植物一般用RUBISCO
会当凌绝顶,一览众山小
7楼2009-03-02 23:12:36
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