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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 请问提取出的DNA可以在65℃放长时间？
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wdd608

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问提取出的DNA可以在65℃放长时间？ 已有1人参与

因为我提出的DNA浓度有点低，选择放在65度烘干箱富集，请问DNA在65度耐受吗？会不会出现变性或者断裂？
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1楼 2018-01-02 10:12:56
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-01-04 20:19:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by wdd608 at 2018-01-02 20:47:22
你好，我提取DNA是用专门提病毒的试剂盒提的病毒DNA，请问乙醇沉淀具体步骤是怎么样的呀？富集效果怎么样？感谢回复。...

   又看见你了，乙醇沉淀我在你那个帖子里回复了。

65℃ 烘干意味着你需要放置在敞口容器里，这样相对容易污染，建议不要。

至于核酸变性或断裂的问题，你可以这么考虑，典型的PCR，95℃核酸会变性，这种变性仅仅是双链打开，温度降低后是可恢复的。
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核酸提取与Taqman诊断
4楼2018-01-04 15:26:58
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普通回帖

暮歌g

新虫 (初入文坛)
用乙醇沉淀一下不是更快吗！

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2楼2018-01-02 20:07:49
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 暮歌g at 2018-01-02 20:07:49
用乙醇沉淀一下不是更快吗！

你好，我提取DNA是用专门提病毒的试剂盒提的病毒DNA，请问乙醇沉淀具体步骤是怎么样的呀？富集效果怎么样？感谢回复。
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3楼2018-01-02 20:47:22
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FEN1

新虫 (初入文坛)
调成终体积浓度75乙醇沉淀

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5楼2018-01-04 16:52:11
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2018-01-04 15:26:58
   又看见你了，乙醇沉淀我在你那个帖子里回复了。

65℃ 烘干意味着你需要放置在敞口容器里，这样相对容易污染，建议不要。

至于核酸变性或断裂的问题，你可以这么考虑，典型的PCR，95℃核酸会变性，这 ...

没错，又是我。我是把DNA放在65度富集的，这种效果之前试的富集的还不错，但是担心65度温度会不会太高，DNA会不会已经变性或者断裂，请教一下你们这些有经验的同学，我的感觉是不会，因为提DNA的时候不是还在65水浴么，还有PCR的时候复性都在六十多度的。
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6楼2018-01-04 18:11:39
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by wdd608 at 2018-01-04 18:11:39
没错，又是我。我是把DNA放在65度富集的，这种效果之前试的富集的还不错，但是担心65度温度会不会太高，DNA会不会已经变性或者断裂，请教一下你们这些有经验的同学，我的感觉是不会，因为提DNA的时候不是还在65水浴 ...

嗯，DNA本身不会有问题的，主要是考虑核酸污染的问题。
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核酸提取与Taqman诊断
7楼2018-01-05 13:20:58
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by FEN1 at 2018-01-04 16:52:11
调成终体积浓度75乙醇沉淀

???
8楼2018-01-06 21:19:48
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山舞银蛇

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by wdd608 at 2018-01-06 21:19:48
???

他给你推荐75%，是典型的浓度，乙醇终浓度在50%~100%都可以沉淀核酸
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核酸提取与Taqman诊断
9楼2018-01-06 23:05:32
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wdd608

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 山舞银蛇 at 2018-01-06 23:05:32
他给你推荐75%，是典型的浓度，乙醇终浓度在50%~100%都可以沉淀核酸...

那应该用什么样的终浓度呢？凭您的经验
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10楼2018-01-07 15:31:33
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