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慢病毒稳转膜蛋白后细胞对puro敏感?
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请教大家,我目前在做一个截短体膜蛋白的稳转细胞系。构建了慢病毒质粒后,用其中表达膜蛋白的质粒直接转染目标细胞,经过流式检测,发现蛋白表达在膜上,就包装了慢病毒。 慢病毒有两个,一个是膜蛋白和rfp 融合表达,一个是单独膜蛋白。慢病毒感染后48小时加puro 筛选,这个时候就特别奇怪,单独表达膜蛋白的感染细胞筛选后全部死亡。膜蛋白和rfp融合的,有部分细胞存活,且有红色荧光。等融合表达细胞长满后,消化做流式,发现细胞90%多rfp阳性,但是膜蛋白阳性率只有2%。我现在怀疑是不是表达了膜蛋白的细胞对puro敏感呢?所以只能分选? 谢谢大家了 发自小木虫IOS客户端 |
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