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求大神指导，葡萄球菌 PFGE 分型~~~~~ 已有1人参与
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各位大神，小妹做葡萄球菌的PFGE分型有段时间了，前辈们发的贴也有看仍然还是弄不出来，在此发帖求大神指导~~~ 主要步骤：1. 制备PLUG：SKG胶中另加了0.5ml的SDS，菌液加4ul溶葡萄球菌素； 2. 细胞裂解：H9812是CLB+25ml蛋白酶K；葡萄球菌是EC裂解液； 3. 酶切：5ul 用的TAKARA H9812是2h，葡萄球菌6h 最后跑出来的图惨不忍睹T^T~~~~~~~~· 1泳道是H9812, 2~5泳道是葡萄球菌 6泳道是H9812 7~10泳道是葡萄球菌 11~15泳道是裂解洗好的胶块，没有酶切的 （11是H9812,12~15是葡萄球菌） PS:有木有好心的前辈们赏一份儿详细点的实验方案呀~~~我是结合其他实验室师姐给的方案加CDC，又有人说按照CDC做不出来，好混乱呀，我所在实验室不做这个，后悔啊~~千挑万选整一个这么麻烦的  ，求前辈们给个方向 葡萄球菌pfge.jpg |
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snoopytbw
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首先，要问问你，是不是做的金葡 其次，SDS胶这步，金葡是不加SDS的，就是1%TE琼脂糖 第三，溶葡菌素加的少了点，试试加到15-20uL，反正按照pulseNET的SOP是加4uL，但是结果通常都会多加点，效果好很多哦。 第四，蛋白酶K在制作胶块的时候在1.5ml离心管里面也需要加20uL，在50mlCLB里面加的是25uL，不是25mL。。。。 最后，H9812你都切这么差。。说明整个程序没有完全按照SOP走，比如ddWater，别以为普通水就可以，比如各种裂解液的pH值，等等，酶切体系差1uL都会有点差异的，还是慢慢做吧。我做了4年了。。。还没到完美，嘿嘿。 |
2楼2017-12-18 14:51:33
snoopytbw
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3楼2017-12-18 14:53:11
