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小鬼头555

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神指导,葡萄球菌 PFGE 分型~~~~~ 已有1人参与

各位大神,小妹做葡萄球菌的PFGE分型有段时间了,前辈们发的贴也有看仍然还是弄不出来,在此发帖求大神指导~~~

主要步骤:1. 制备PLUG:SKG胶中另加了0.5ml的SDS,菌液加4ul溶葡萄球菌素;

                  2. 细胞裂解:H9812是CLB+25ml蛋白酶K;葡萄球菌是EC裂解液;

                  3. 酶切:5ul 用的TAKARA  H9812是2h,葡萄球菌6h

最后跑出来的图惨不忍睹T^T~~~~~~~~·
1泳道是H9812,   
2~5泳道是葡萄球菌   
6泳道是H9812   
7~10泳道是葡萄球菌  
11~15泳道是裂解洗好的胶块,没有酶切的 (11是H9812,12~15是葡萄球菌)

PS:有木有好心的前辈们赏一份儿详细点的实验方案呀~~~我是结合其他实验室师姐给的方案加CDC,又有人说按照CDC做不出来,好混乱呀,我所在实验室不做这个,后悔啊~~千挑万选整一个这么麻烦的,求前辈们给个方向

求大神指导,葡萄球菌 PFGE 分型~~~~~
葡萄球菌pfge.jpg
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先,要问问你,是不是做的金葡
其次,SDS胶这步,金葡是不加SDS的,就是1%TE琼脂糖
第三,溶葡菌素加的少了点,试试加到15-20uL,反正按照pulseNET的SOP是加4uL,但是结果通常都会多加点,效果好很多哦。
第四,蛋白酶K在制作胶块的时候在1.5ml离心管里面也需要加20uL,在50mlCLB里面加的是25uL,不是25mL。。。。
最后,H9812你都切这么差。。说明整个程序没有完全按照SOP走,比如ddWater,别以为普通水就可以,比如各种裂解液的pH值,等等,酶切体系差1uL都会有点差异的,还是慢慢做吧。我做了4年了。。。还没到完美,嘿嘿。
2楼2017-12-18 14:51:33
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

欢迎站内联系,嘿嘿。
3楼2017-12-18 14:53:11
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