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凯伦爱佳佳金虫 (正式写手)
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扩扩扩，扩不出来条带！！！ 已有2人参与
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最近用cDNA在扩两个3k的条带，怎么扩都扩不出来，我真是快醉了！！！设计了好几个引物了都，唉。。。一个月了！！！ 发自小木虫Android客户端 |
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诸葛小汐
铁杆木虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-12-15 09:23:04
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有的长的cDNA扩增是有难度 你首先用RT-PCR检测下 你要的cDNA有没有 然后设计overhang的引物分段PCR 然后用fusion的方法用 载体连起来 发自小木虫Android客户端 |
2楼2017-12-14 23:59:08
凯伦爱佳佳
金虫 (正式写手)
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3楼2017-12-15 00:54:20
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先用actin检测cDNA，保证其质量没问题。选择的引物是否有接头？如果有可以先去掉接头扩增；可以选择做剃度退火，设置55到65的退货温度尝试；可以做touchdown pcr，活着热启动 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-12-15 20:01:46