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gzdeng铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
求助，请帮忙翻译 翻译好了的前两位各发5个金币，请版主代发
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由于没有生物背景，现需要翻译下面内容，怕翻译不准，请兄弟姐妹们帮帮忙，非常感谢！ DNA templates were prepared by the freeze-thaw method in a DNA extraction buffer(25). PCR was conducted for 40 cycles, with denaturation at 94°C for 60 s, annealing for 30 s, and extension at 72°C for 30s using the PROGRAM TEMP CONTROL SYSTEM (PC-800, ASTEC, Fukuoka). Here, considering that each Cl20 or C230 target sequence has a different homology score with the designed primers, a step down method was employed (26). For the Cl20 genes, the annealing temperature was 61’C in the first 10 cycles followed by a step down to 59°C in the next 15 cycles, and 57°C in the last 15 cycles, while for the C230 genes, the annealing temperature was 59°C in the first 10 cycles, 57°C in the next 15 cycles, and 55°C in the last 15 cycles. Aliquots (10~1) of the PCR products were analyzed by electrophoresis on a 1.0% agarose gel stained with 0.5 pg/ml ethidium bromide. [ Last edited by gzdeng on 2009-3-4 at 14:43 ] |
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4楼2009-02-27 23:46:46
sutao1979
木虫 (著名写手)
小木虫10年groupleader
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DNA模板需要在提取液上冻融之后备用。在PCR仪（PC-800, ASTEC, Fukuoka）设定上为40个循环，95度变性60秒，退火30秒，72度延伸30秒；这里要考虑到C120和C230两个目的基因有不同的同源性的引物，应用step down(降落)的方法来扩增（如下）。对于C120基因，前10个循环退火温度为61度，紧接着的15个循环使用59度，然后最后15个循环是57度；而C230基因前10个循环59度，接着15个循环57度，最后十五个循环是55度来退火；均等的（10-1）PCR产物通过1%的琼脂糖凝胶电泳检测，0.5 pg/ml 的溴化乙啶染色观察 好像是说tail-pcr的吧？？？一种降落pcr常用的方法 [ Last edited by sutao1979 on 2009-2-28 at 00:12 ] |
2楼2009-02-27 23:10:56
cauzhangtao
木虫 (正式写手)
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| 大概的意思是：DNA模板是通过在DNA提取缓冲液冻融法制备的，PCR设置为40个循环，变性温度为94℃，时间为60s，退火30s，利用程序温度控制系统，72度延伸30s，此时考虑每一个Cl20 或C230目标序列不同的核心和设计的引物，接下来的步骤是：对于Cl20基因，在前是个循环退火温度是61摄氏度。在接下来的15个循环退火温度降为59摄氏度，最后的15个循环为57度，然而对于C230基因，最初的是个循环退火温度为59摄氏度，接下来的15个循环退火温度为57，最后的15个循环为55摄氏度，等部分的PCR产物通过1%琼脂糖凝胶电泳分析，用0.5pg/m lEB染色。你再顺一下就可以了。 |
3楼2009-02-27 23:20:08
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