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ywwabc

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by 车前子ing at 2017-12-14 15:32:29
我现在手头就只有一个非特异性的抗体,每次做完后发现只要有核的地方就有荧光,导师说我的目的蛋白表达量不可能那么高,说都是非特异性的,我也知道是非特异性的啊,我跟导师说了没有特异性抗体我做不出来,结果导 ...

结果导师说让我调整荧光比例:这句话你们导师说的意思是调整二抗的量吗?意思会不会是试试降低一抗的量,降低荧光强度呢?我猜测的哈
11楼2017-12-14 16:02:40
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车前子ing

新虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by ywwabc at 2017-12-14 16:00:02
你都说了是非特异性的抗体,那么除了识别你的目的蛋白,应该还识别别的蛋白,,所以空白细胞有荧光很正常啊!调整二抗的比例?调整这个有啥用呢?降低荧光率吗?不靠谱啊,还有,你的抗体是什么抗体?为啥有非特异 ...

我的抗体是实验室自己免疫动物制备的,那现在还有什么别的办法能鉴别我的蛋白吗
12楼2017-12-14 19:37:36
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车前子ing

新虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by ywwabc at 2017-12-14 16:00:02
你都说了是非特异性的抗体,那么除了识别你的目的蛋白,应该还识别别的蛋白,,所以空白细胞有荧光很正常啊!调整二抗的比例?调整这个有啥用呢?降低荧光率吗?不靠谱啊,还有,你的抗体是什么抗体?为啥有非特异 ...

我用的一抗是实验室自己免疫动物制备的,是个多抗,那现在还有什么方法能够检测我的蛋白有没有表达
13楼2017-12-15 09:38:51
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ywwabc

新虫 (小有名气)

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13楼: Originally posted by 车前子ing at 2017-12-15 09:38:51
我用的一抗是实验室自己免疫动物制备的,是个多抗,那现在还有什么方法能够检测我的蛋白有没有表达...

是导师不让外购吗?多抗一般非特异性结合比较多,,,可以试试外购的单抗
14楼2017-12-15 11:08:12
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ywwabc

新虫 (小有名气)

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13楼: Originally posted by 车前子ing at 2017-12-15 09:38:51
我用的一抗是实验室自己免疫动物制备的,是个多抗,那现在还有什么方法能够检测我的蛋白有没有表达...

多抗你之前验证过吗?质量如何?目的抗体的效价大概多少?像你们导师说的降低1抗使用的量,,如果效价高的话,,可以适当减少非特异性结合,不过这个量需要你梯度尝试,看看能不能摸索出来吧
15楼2017-12-15 11:10:53
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