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周周Juaner

新虫 (初入文坛)

[交流] 求大神带!酵母真核表达质粒线性化酶的选择 已有3人参与

利用酵母X-33构建真核表达时,质粒选择的是pPICZaA,前期扩增目的片段时,酶切位点选择的是Sal1,目的基因又中含有Sacl1内切酶,请问做质粒线性化时还能选Sal1吗?如不能,还有哪些酶可以选?初次接触表达,不是很懂,麻烦大家帮忙解答,求大神带。谢谢啦~

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zhxian

新虫 (小有名气)


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你好,可以和你换点载体不?

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2楼2018-12-28 00:27:47
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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可选择的线性化位点有:1、Sac I;2、Pme I;3、Bst X I三个,如果序列内部有Sac I的话就不能再选了。剩下两个你看看目的基因里边有没有。

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  • 2018-12-28 12:19:15, 505.66 K

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3楼2018-12-28 12:19:17
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15052123882

新虫 (初入文坛)

4楼2019-03-29 00:17:10
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15052123882

新虫 (初入文坛)


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引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2018-12-28 12:19:17
可选择的线性化位点有:1、Sac I;2、Pme I;3、Bst X I三个,如果序列内部有Sac I的话就不能再选了。剩下两个你看看目的基因里边有没有。

您好!请问您们用pPICZaA这个载体,长出来的转化子,后期还用博莱霉素抗性梯度筛选吗,像9K载体G418筛选高拷贝那样的,刚开始做,不太懂,想请教下大家

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5楼2019-03-29 00:20:25
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