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longmed

新虫 (初入文坛)

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专业: 肿瘤研究体系新技术

[交流] LiveCyte®DMSO-free细胞冷冻液实验操作步骤已有1人参与

LiveCyte®DMSO-free细胞冷冻液的有效组分为氨基酸衍生物，成分简单明确，不含DMSO、不含任何人源或动物源成分。
DMSO是常用的渗透性冷冻保护剂，使用广泛。但某些类型的细胞对DMSO敏感，使用含DMSO的细胞冷冻液可能会影响细胞的功能，尤其是干细胞。临床上直接使用经DMSO冻存的细胞会引发呕吐和腹泻，还会造成神经系统、呼吸系统等组织损伤。
使用方法：
1. 检查并确认细胞没有真菌、细菌、支原体污染。
2. 冻存前的细胞处于对数生长期最佳。
3. 计数待冻存的细胞数量。悬浮细胞应180g离心5~10min后除去培养基，贴壁细胞应消化后计数，再离心除去培养基。
4. 计算应使用的LiveCyte® DMSO-free体积。首先确定细胞冻存密度（可用密度为2~40×106/ml，最佳密度为4~20×106/ml）。
5. 吸取适量LiveCyte® DMSO-free，重悬细胞，立即0.5ml/管分装至细胞冻存管（可冻存体积为0.2~1ml/管，最佳体积为0.5ml/管）。
6. 立即将冻存管移入-80℃低温冰箱，不能采取任何程序降温措施或使用程序降温装置。如果无法立即移入-80℃低温冰箱，至少应当先移入0℃以下环境中（如-20℃冰箱）短暂存放10min左右，同样不能采取程序降温。冻存液重悬后的细胞不能在室温或2~8℃静置超过10min以上。
7. -80℃冰箱过夜后的冻存管，要立即移入液氮中储存，不可于-80℃长期冻存。
8. 复苏时，先准备室温或37℃预温的基础培养基，再37℃水浴冻存管，不断轻摇，待剩余1粒米大小的冰块时，迅速移出水浴。然后按1：15~1：30稀释比例，立即用基础培养基稀释融化的细胞悬液，接着180g离心5~10分钟，再重悬细胞使用。
9. 本品仅供研究使用。

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