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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Genome Walking Kit 的相关问题 请教大家
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崔红利

新虫 (正式写手)

[交流] Genome Walking Kit 的相关问题 请教大家

我最近在做步移试验遇到了一些困难，请各位高手予以指导：
就是三次PCR的片段的大小有严格的限制吗？差别太大还能够做出来吗？

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-18 at 10:21 ]
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1楼 2009-02-26 10:23:55
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qqsvery

木虫 (著名写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0): 11-6 08:47
染色体步移实验吗？为了获取与已知序列相邻的未知序列？我没有做过这方面的实验，但是我们也做基因定位的，现在的程序算是很成熟了，可以探讨探讨！
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谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
2楼2009-11-06 08:34:18
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qqsvery

木虫 (著名写手)
你做的原理是不是：根据已知DNA序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物（SP Primer），与试剂盒中提供的四种经过独特设计的退火温度较低的兼并引物，即AP1、AP2、AP3、AP4进行热不对称PCR反应。


通常情况下，其中至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称PCR反应，通过三次巢式PCR反应即可获取已知序列的侧翼序列。
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谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
3楼2009-11-06 08:37:35
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dongjiqiao

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我觉得好像是DNA片段越来越小，因为是巢式
PCR嘛，越来越往里缩小范围，目的基因应该是最核心的
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long,longlong.
4楼2009-11-06 10:24:13
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我没用过TAIL PCR，用过SiteFinding-PCR，效果很好。楼主不妨试试。
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5楼2009-11-06 10:35:24
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