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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » crispr靶位点
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Наира

新虫 (正式写手)

[求助] crispr靶位点 已有2人参与

crispr靶位点设计是以dna序列为模版设计吗？那万一一个靶基因位点设计在内含子上怎么办？

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1楼 2017-11-30 21:02:17
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shinecyy

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Наира at 2017-11-30 22:13:50
谢谢您的回复！那以mRNA为模版的话万一跨了内含子怎么办？
...

跨内含子其实问题不大，如果你的目的是敲除的话，只要有部分的gRNA在靶点附近，你就可以加入终止密码子终止转录。

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6楼2017-11-30 22:46:39
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Наира

新虫 (正式写手)
求！

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2楼2017-11-30 21:35:36
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shinecyy

新虫 (正式写手)
★ ★ ★
drwhoknowss: 金币+3, 鼓励交流 2018-03-06 01:55:49
根据实验目的进行设计。一般的，gRNA都是以DNA序列的外显子(一般做敲除)为模板，长度为17-20bp左右的含有PAM区的序列，也可以以mRNA为模板。

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3楼2017-11-30 21:53:28
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Наира

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shinecyy at 2017-11-30 21:53:28
根据实验目的进行设计。一般的，gRNA都是以DNA序列的外显子(一般做敲除)为模板，长度为17-20bp左右的含有PAM区的序列，也可以以mRNA为模板。

谢谢您的回复！那以mRNA为模版的话万一跨了内含子怎么办？

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4楼2017-11-30 22:13:50
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Наира

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shinecyy at 2017-11-30 21:53:28
根据实验目的进行设计。一般的，gRNA都是以DNA序列的外显子(一般做敲除)为模板，长度为17-20bp左右的含有PAM区的序列，也可以以mRNA为模板。

不能给你金币呢？总出现不是应助帖

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5楼2017-11-30 22:14:48
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Наира

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by shinecyy at 2017-11-30 22:46:39
跨内含子其实问题不大，如果你的目的是敲除的话，只要有部分的gRNA在靶点附近，你就可以加入终止密码子终止转录。
...

没懂您说的。。crispr会加入终止密码子？但是非常感谢您的时间！谢谢！

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7楼2017-11-30 23:24:50
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shinecyy

新虫 (正式写手)
同源重组加入终止密码子~

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8楼2017-11-30 23:52:45
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1272356152

新虫 (正式写手)
本人专注CRISPR～Cas9五年，自该技术出现到2018一直从事有关方面研究。主要涉及微生物，细胞，病毒编辑。现提供有偿基因编辑技术辅导，需要请加1471105826QQ。

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9楼2018-03-04 23:25:01
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PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在内含子也是可以的，只是如果你的目的是为了敲除该基因的话，不一定能达到预期效果
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10楼2018-03-05 15:02:45
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