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zhiqiang5070木虫 (正式写手)
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[求助]
CRISPR/Cas9技术敲除CHO
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最近在建CRISPR/Cas9技术敲除CHO的平台，遇到了点问题。 利用CRISPR系统敲除CHO-S细胞的GS基因。用的是sg和Cas9基因同载体（商品质粒），通过CRISPy设计sg，sg前加G，测序证明sg-DNA双链连入载体。构建完成，利用电转和脂质体转染，摇瓶培养48 h后，通过提基因组，侧翼PCR后，将纯化的PCR产物退火，用T7酶切，未见切开的条带，测序也未见套峰。可以认定敲除没有成功。 因为用于后期的单抗药物，使用的质粒没有GFP，也没有筛选压力。效率肯定会低。 做了一个月了，未见结果。请大家帮忙分析一下原因。 Q：1. 如何提高敲除效率 2. 如何能够监测出效率低下的敲除是否成功 3. 有做过CHO细胞敲除的吗 [ Last edited by zhiqiang5070 on 2017-11-29 at 10:17 ] |
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3楼2018-03-06 12:36:25
1272356152
新虫 (正式写手)
- 博学EPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 873.5
- 散金: 604
- 红花: 7
- 帖子: 469
- 在线: 103.4小时
- 虫号: 1368292
- 注册: 2011-08-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
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本人专注CRISPR～Cas9五年，自该技术出现到2018一直从事有关方面研究。主要涉及微生物，细胞，病毒编辑。现提供有偿基因编辑技术辅导，需要请加1471105826QQ。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2018-03-04 23:26:02
4楼2018-03-19 14:15:25