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jinnini125

木虫 (小有名气)

[交流] 测序都对了,酶切验证大小不对…… 已有3人参与

有一个重组质粒,我送去测序的结果都对了,可双酶切后,总是载体大小和片段大小都不对。请问一下这是怎么回事?

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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者


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怎么验证的“载体大小和片段大小都不对”?

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有时一本正经,有时胡言乱语。
2楼2017-11-26 15:52:29
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jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by still2008 at 2017-11-26 15:52:29
怎么验证的“载体大小和片段大小都不对”?

你好,是这样的。如图所示,marker是从上到下8000.5000.3000.2000.1000.750.500.300.150。带1和带2是启动子的不同长度的片段,条带1是插入2000的长度,带2是插入了1600的长度。酶切图按理说应该是除了插入片段大小不同,其余差不多才对。空载体大小是14758呢……
测序都对了,酶切验证大小不对……



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3楼2017-11-26 16:20:27
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-11-29 07:50:41
酶切出的目的片段大小应该没问题吧,你是觉得载体可能有问题,两个载体的大小差距有点大。我估计你测序也只是测的目的片段吧,如果是这样,那确实有可能左边的载体有问题。你可以再做酶切验证一下,找载体上的酶切位点,切两个载体和空载体(如果有图谱的话),看看是否符合预期。

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4楼2017-11-26 20:04:31
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
以测序结果为准。载体结构(线状?环状?)也会影响它电泳的迁移速度。

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有时一本正经,有时胡言乱语。
5楼2017-11-28 19:34:18
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Julytan

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
正常酶切连接后以测序为准,线型和环型电泳速率不一样,环型跑的快

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6楼2019-09-28 09:58:27
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