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xuzhengnjut新虫 (正式写手)
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关于甘油作为唯一碳源高密度发酵培养BL21 已有2人参与
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打搅各位，交流一个实验问题：我用BL21(DE3)表达一个45KDa的蛋白，因为该蛋白是糖代谢中的一个酶，因此用葡萄糖做唯一碳源的时候生长很紊乱，为了解决这个问题我用甘油作为唯一碳源，在5L罐子做高密度培养，现在的问题是菌体吃甘油速度很慢，生长速度也很慢，但是我在很多文献中都看到大肠杆菌利用甘油也是很厉害的，而且生长很好。我目前发酵24小时OD只能做到20左右，我感觉很不正常，哪位做过甘油为碳源的大肠杆菌发酵能够指点一下？谢谢 发自小木虫Android客户端 |
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5楼2017-11-28 18:04:21
wt3532
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【答案】应助回帖
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大肠杆菌使用纯甘油作为碳源没问题啊，小罐子接种5%左右，接种4h就能达到OD=20（当然跟菌本身也有关系，部分大肠生长速度会慢一些） 有机培养基、无机培养基都试过，问题不是很大。 实在不行我觉得你可以LB中加1%甘油试一下看大肠能不能生长起来。 |
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2楼2017-11-27 10:19:43
xuzhengnjut
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摇瓶加甘油可以生长，我不知道是不是我的培养基氮源太多，我蛋白胨20克每升，酵母粉10克每升，还有硫酸铵5克每升。这个是用摇瓶优化出来的，然后初始甘油30克每升，5L罐接种量5%，种子培养基是LB，通气1:1，搅拌400rpm，接种后3小时才能长到1.0，6小时长到5.0，12小时长到10，就是很慢的，不知道为什么 发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-11-27 15:41:48
Mr.XXX
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4楼2017-11-28 16:30:52